• Forum - Profil, ADN, Digestion

miniprep ADN et RNase

Lorsque je regarde mon profil ADN après digestion il est exactement le meme que le non digéré. Sachant que le profil du non digéré n'est pas la taille que j'attendais (je vois certainement plusieurs formes de mon ADN).  [...] Le résultat après digestion est que pour un plasmide j'obtiens un profil à 7000 et 3000pb alors que la deuxième bande devrait etre à 1000. Et pour le deuxième plasmide j'ai seulement une bande à 3000pb alors que je devrai avoir une seconde vers les 5000.  [...]

[Microbiologie] Hybridation

Coucou tous le monde, au fait je vais faire de l'hybridation avec une sonde 16s et une sonde d'un gene de résistance,pour voir si le gene est chromosomique ou non, (puisque le 16s est du chromosome),pour la digestion donc j'ai utilisé l'enzyme. Iceu-1 (qui coupe l'adn) mais lors de la migration.  [...] Après, si l'expérience est un Southern-Blot (ou équivalent), la fréquence de coupure de l'ADN par l'enzyme doit être assez élevé pour que le profil de digestion soit lisse. Dans mon ancien labo, on utilisait des enzymes classique de type EcoRV, HindIII... Le point difficile étant que la zone de référence (pour toi le 16s) et la zone à tester (le gène de résistance) doivent toujours être détecté (et donc qu'il ne faut pas couper au niveau de la sonde - qui n'est généralement pas excessivement grande -500pb pour moi).  [...]

[Biologie Moléculaire] electophorese des fragements d'ADN

apres electophorese des 2 genes A et B on obtient le profil 1 alors je vois que dans le profil 1 on a migration de 2 fragement de gene B ça veut dire on a déja subit l'ADN a une enzyme de restriction qui a coupé B mais pas A (alors que ça n'est pas indiqué dans l'exercice).  [...] dans le profil 1 on a migration de 2 fragement de gene B ça veut dire on a déja subit l'ADN a une enzyme de restriction qui a coupé B mais pas A (alors que ça n'est pas indiqué dans l'exercice).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Ensuite, il n'est pas possible de mélanger toute les enzymes. Soyons fou, et admettons que tu veuille mettre ton plasmide et tes 6 enzymes en même temps. Tu va devoir choisir un tampon de digestion (ph, concentration en sel) unique pour toute tes enzymes. et certaines ne fonctionneront alors pas (enfin, il est possible une astuce, mais pas avec un choix restreint d'Ez).  [...] Enfin, je conseillerai de faire cette analyse en deux étapes. La première digestion/migration avec des enzymes seules (+plasmides ), les 6. Puis tu t'arrêtes, tu regardes le profil de digestion, et tu relance une digestion avec des doubles (ou triple, si possible) digestion.  [...]

[Biochimie] Poids plus élévé après digestion enzymatique

tu sais quel est le profil que tu dois obtenir après digestion si c'est un produit PCR c'est linéaire. Tu n'as qu'un fragment apres digestion C'est pas du a une structure de repliement.  [...] C'était une digestion des sites de restrictions d'un fragment que j'avais amplifié par PCR, sur mon gel je ne dois obtenir qu'un seul fragment d'environ 1000bp.  [...]

La PCR fragments d’adn

Alors pour faire une PCR sur l'ADN d'un individu, eh bien il faut un prélèvement qui peut être de multiple nature. Classiquement, on demande aux gens de frotter l'intérieur de leur joue avec un coton tige pour le recouvrir de cellules de la muqueuse. Le coton tige est trempouillé dans un tampon, on peut casser préalablement les cellules pour qu'elles déversent leur contenu (dont l'ADN) dans le tampon.  [...] Vous avez bien compris la chronologie des événements. PCR puis électrophorèse. Mais vous ne mentionnez pas les enzymes de restriction alors que c'est le plus important, c'est cette coupure par les enzymes de restriction de l'ADN non codant précédemment amplifié en PCR qui va permettre de donner des profils différents, qui seront ensuite révélés sur le gel après électrophorèse.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Ensuite, avec différents échantillons, on a fait pour A et B, une PCR, une digestion par EcoRI puis on a fait migrer ces deux produits dans un gel dagarose 1% avec l'ADN A et B non digéré. Au final on a 10 puits.  [...] Ensuite pour le puits 7, c'est normal, c'est un témoins ou l'ADN n'a pas été ajouté. Concernant le puits 5, je ne sais pas trop, étant donné que nous ne devions ajouter qu'un microlitre d'ADN à notre préparation, je pense que j'ai du commettre une erreur à ce moment là.  [...]

[Divers] Comment savoir si l'on est homozygote avec un Rhesus+

Je voudrais savoir s'il existe un procédé qui permet de connaitre le génotype (D/d par exemple) d'une personne afin de déterminer si une personne de Rhésus positif possède deux allèles positifs ou un allèle positif et un allèle négatif.   [...] Pour savoir si on a affaire à un homozygote ou un hétérozygote on peut par exemple utiliser la technique de PCR-RFLP. On aura alors un profil de digestion différent pour chacun.  [...]

[Microbiologie] hybridation moléculaire

je veux savoir également comment je pourrais discuté les résultats de cette hybridation moléculaire (ADN-ADN)afin de montrer la localisation chromosomique de gene de resistance bla lut.(la figure ci-joint).la premiere photo c'est un profil électrophorèse en champ pulsé (PFGE) de l'ADN de la souche Pseudomonas luteola digeré avec l'enzyme I-CeuI.  [...] la photo B,c'est l'hybridation des fragments avec une sonde spécifique d'un gène de résistance,et la photo C c'est l'hybridation avec une sonde 16s.les rèsultats de cette analyse a montrè que la sonde bla lut,specifique de gene a été hybridé avec un fragment de taille entre 700kb-800kb et il a hybridé aussi avec la sonde 16s,et pourcela les resultats suggere que le gene est chromosomique.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'amorces

Après une PCR, nous avons eu sur l'electrophorèse un profil pour le témoin NEGATIF et qui rassemle presque au même profil de l'ADN test.  [...] Ce qui reste c'est les amorces. Durant j'avais trois amorces que je les tester,ont toutes donné une contamination au niveau du témoin NEGATIF, et ce qui m'étonne plus que le profil du contaminant ca diffère d'une amorce a l'autre.  [...]