• Forum - Probabilité, Hybridation, Amorces, Quantité, ADN

[Génétique] désignaion d'amorces pour une qpcr

D'arès mes connaissances les amorces doivent etre spécifiques pour quelles ne s'hybrident pas à des régions autres que mes cibles.Mais est ce que je peux désigner des amorces dégénérées etant donnée que les séquences présentent des variations meme dans les régions conservées.  [...] Des amorces dégénérées pour une qPCR Non. Sinon l'efficacité d'amplification dépendra majoritairement de la probabilité d'hybridation de tes amorces et non plus de la quantité d'ADN.  [...]

Questions sur la PCR

Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition.  [...] C'est une question de probabilité, en moles les amorces sont largement majoritaires. Donc même si une partie de l'ADN se réhybride avec son brin complémentaire, la grande majorité s'hybridera avec l'amorce. La taille n'a pas vraiment à voir, ensuite c'est plus une question de Tm (température d'hybridation).  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthode de diagnostic MLPA

Après hybridation parfaite du couple de sondes à la cible et ligature par l'ADN ligase, on réalise une PCR pour quantifier le nb de cibles présentes initialement en utilisant un seul couple d' amorces complémentaires aux séquences universelles notées X et Y.  [...] Ce que je ne comprends pas c'est comment on va pouvoir amplifier une séquence = la sonde, avec 2 amorces qui vont se lier aux 2 extrémités de cette même séquence Il ne faut pas respecter le sens 5'-3' (et donc, une amorce doit être complémentaire à X par exemple, et l'autre doit avoir la même séquence que Y).  [...]

[Biologie Moléculaire] Explications rapides sur la PCR

On fonctionne avec des nombres pairs d'amorces car il y a deux brins d'une part, ça permet donc de multiplier la vitesse de fabrication de ces amplicons et de plus ça réduit la taille des amplicons, car au fil des cycles de plus en plus d'amplicons seront de la taille déterminée par les amorces.  [...] Je dirais plutôt que les amorces en excès augmentent la probabilité que celles ci s'hybrident avec l'ADN simple brin, et évite ainsi la renaturation de l'ADN en double brin. On met pas l'ADN en excès.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR classique - PCR en temps réel !

Est ce que le principe de la PCR en temps réel est le même que celui de la PCR classique, et la seule différence est au niveau de l'analyse des produits amplifiés ( les amorces de l'ADN) ou il y'a une autre différence ou que j'ai rien compris du tout et que j'avais l'impression.  [...] La PCR, polymerase chain reaction, est un ensemble de réaction visant à amplifier un fragment d'ADN recherché. Pour faire court, on prend des amorces (Brins d'ARN) qui iront s'hybrider au début et à la fin du fragment que l'on veut amplifier. Grâce à une polymérase (Taq.  [...]

[Biologie végétale] pcr : LP/RP et LB/RP pour une plante

PS. je précise que les amorces dessinées en losange/carré/rond c'est de la vulgarisation pour montrer un genre de puzzle, en vrai on va parler d'hybridation/appariement entre les nucléotides des amorces et ceux de l'ADN de la plante.  [...] Alors je crois que tu t'es emmêlé les pinceaux, tu viens de dire je comprend pas le fait que LP/RP ne peut pas se lier a l'ADN normal alors que justement, tu nous as présenté ce couple d'amorces comme celui qui peut se fixer et donc permettre l'amplification du gène normal.  [...]

Température d'hybridation et PCR

Maintenant pourquoi on se place 5°c en dessous du Tm pour avoir la température d'hybridation J'y pense maintenant ça doit être un compromis entre une dénaturation suffisante de l'ADN (ou plutôt une renaturation pas trop rapide de l'ADN après l'étape de dénaturation pour permettre l'hybridation aux amorces) et une température suffisamment basse pour permettre l'hybridation (d'où 5° en dessous du Tm). Non.  [...] La denaturation s'effectue a 94°C pour séparer les deux brins d'ADN. Les amorces etant en large exces par rapport a la matrice lors de l'hybridation (a un Tm bas pour etre certains qu'elles s'apparieront) leur hybridation avec la matrice est favorisée.  [...]

Biotinylation dans l'hybridation inverse

au sujet de l'hybridation inverse, si j'ai bien compris, on amplifie l'ADN à l'aide de plusieurs couples d'amorces, dont seulement une (amorce dans le couple) est biotinylée.  [...] pour aller à l'essentiel (parce que suis pas du tout claire je sens...). est-ce bien l'amorce complémentaire de la séquence d'intéret, seulement, qui doit etre biotinylée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Anti -sens ???

Alors alors je crois avoir la réponse...Par exemple, dans la PCR, les brins sens et anti sens sont utiliser comme des amorces...ils ont pour rôle de cibler la séquence d'interêt (qu'on souhaite amplifier), par conséquent, ils ne sont en aucun cas complémentaires c'est d'ailleurs un critére de choix.  [...] les amorces utilisées ne sont jamais complémentaires...bahhhh sinon il y aura hybridation entre ces amorces avant même d'être en contact avec l'ADN... voilà donc pour la PCR, ce n'est qu'un exemple mais je sais pas si je peux généraliser concernant la complémentarité entre sens et anti sens...qu'en pensez vous.  [...]

[Biochimie] séqunçage technologie 454

J'ai une question concernant la technologie 454 (séquençage). Il y a des choses qui m'échappent.Comment les microbilles peuvent-il fixer un ADN à la fois.  [...] Pour UNE microbille donné on a hybridation d'UN ADN sb. Puis on effectue une amplification par PCR (l'ADN sb amplifié va se fixer sur une autre amorce de la microbille et ainsi de suite...) et donc au final pour UNE microbille donnée on a le même fragment d'ADN sb qui sont fixées sur toutes amorces C'est bien ça.  [...]