• Forum - Préparation, Protéine, Concentration

[Immunologie] Comparaison impossible entre 2 lots anticorps secondaire polyclonal

Pour cela, nous effectuons une courbe standard en 5 points a partir d une préparation purifié de cette protéine pour laquelle ont connait la concentration. Sur le même gel se trouvent les échantillons a doser et un contrôle.  [...] Les résultats ne sont pas du tout comparable, nous avons une grande difference entre les 2 lots. D' ou peux provenir cette différence.   [...]

Purification d'une enzyme

Lors de la purification d'une enzyme, comment par mesure d'activité peut on s'assurer d'avoir obtenu la préparation la plus pure possible et comment vérifier que l'on a obtenu l'enzyme à l'état pur.  [...] Il faut que l'activité spécifique de l'enzyme pure (AS en u/mg) soit connue. On mesure l'activité de la préparation en unité par mL (u/mL) et on dose la concentration en protéine en mg/mL. Ensuite on fait le rapport activité/mL et mg/mL ce qui donne l'AS de la préparation.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

Ok, donc si vous êtes sûr que votre protéine d'intéret est bien produite. Les smears sont en géneral dûs á une mauvaise préparation d'un des deux gels (ou des deux) ou encore au dépot d'un volume trop grop de protéines dans les puits du gel.  [...] Si toute fois elle a toujours le même smear après dépôt d'un plus petit volume de protéine éluée et préparation d'un nouveau gel, elle trouvera peut etre la réponse ici (c'est en anglais).  [...]

[Biochimie] Loi de Beer Lambert

A partir d'un clone bactérien, vous effectuez une extraction plasmidique. Sur une dilution au centième de votre éluât, vous réalisez un dosage au spectrophotomètre. Vous obtenez une densité optique de 0.32 pour 260 nm et de 0.16 pour 240 nm.   [...] Puis j'ai décidé de me servir des données pour calculer la pente de la courbe (Abs en fonction des concentrations) car p = E mais manque de chance je n'ai pas de concentrations mais des longueurs d'ondes en abscisse. ça marche je trouve des valeurs mais du coup j'ai un problème d'unité car on est sur des nm et non de ¼g/¼l.  [...]

[Biochimie] chaine polypeptidique

- Soit vous ne saviez pas grand chose sur le fait que c'est un homo ou hétéromère (les sous-unités de même poids moléculaire se superpose au même Rf de migration) et vous deviez coupler cette expérience avec une chromatographie d'exclusion qui lui n'est pas en condition dénaturante et cela permet de connaitre la masse moléculaire totale de votre protéine où vous pourrez en déduire le nombre de sous-unité.-D.  [...] La cristallographie reste le meilleur moyen de retrouver la structure fine de ta protéine mais la préparation d'échantillon est complexe et non garantie (extraction non dénaturante, cristallisation de la protéine, etc..).  [...]

[HELP]biochimie enzyme

La concentration d'activité catalytique Ccat correspond à l'activité enzymatique par litre de préparation enzymatique, elle s'exprime en U.L -1.  [...] Dans la première expression de Ccat, tu as une variation de concentration (C) et dans la deuxième tu as une variation d'absorbance (A).  [...]

[Divers] Protéine purifiée et anticorps

Lors de la préparation des concours pour l'INRA, je bloque sur une question me demandant ce que l'on espère obtenir en injectant une protéine purifiée à un lapin. Je serai tentée de répondre des anticorps monoclonaux, mais je ne vois pas bien la différence entre une protéine dite purifiée et une protéine tout court.  [...] Non, tu as tout un tas d'épitopes dans une protéine. Prenons le cas d'une protéine à multidomaines. tu peux avoir des anticorps dirigés contre la partie C ou N-terminale mais également contre le domaine 1 le domaine 2, etc. Différents lympho sont susceptibles de reconnaitre une partie de ta protéine, et en fonction de leur maturation vont produire des IgG1, 2a, 2b, etc.  [...]

Coeur et tomate

L'analyse de ces différentes banques de données montre que sa concentration varie suivant le mode de préparation, de cuisson ou de conservation.  [...] Après concertation avec les spécialistes de l'anticoagulation, nous ne réaliserons pas de tableau récapitulant, pour des quantités usuelles, la concentration en vitamine K dans les aliments, celle-ci pourrait prêter à confusion et vous amenez à exclure des aliments.  [...]

[Divers] Les mathématiques en biologie

euh, y a aussi des maths pour la préparation des solutions, des tampons, des dilutions, des regressions linéaires pour les calculs de concentration.  [...] Il devrait y avoir bientôt à cette adresse des cours sur la modélisation de systèmes biologiques, la prédiction d'interaction (ainsi que bien d'autres domaines bien sûr).   [...]

[Biochimie] Histidine : je bloque !!

On cherche la quantité de dichlorhydrate d'histidine et le voume de soude (1mol/L) nécessaires à la préparation d'un litre de tampon de concentration 0,2mol/L et de pH=9.  [...] Tu veux faire 1L de solution tampon de concentration 0,2 mol/L.  [...]