• Forum - Précipitation, ADN, éthanol

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

L'ADN est issu d'un broyat de foie de rat, il a été purifié par une exctraction phénolique, une précipitation dans de l'éthanol absolu et une resolubilisation dans un tampon d'élution TrisHCL 10mM + EDTA 1 mM à pH 8.  [...] J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...]

[Microbiologie] Mise en évidence système SOS bactéries

Sinon, pour les anti-oxydants. si j'ai bien compris, ils détruisent l'ADN -. radicaux libres que l'on peut mettre en évidence (par précipitation grâce à je-ne-sais-quoi, comme lorsque le code génétique a été établi par exemple... C'est ça ).  [...] Je suis pas sur que l'on voit d'autres espèces de bactéries assez rapidement..puisque je suppose que toutes ces infos c'est pour le TIPE sur l'information.Forcément un TIPE ressemble plus a un TPE qu'à un projet de recherche, surtout les expériences sur l'adn (qui est pourtant la première chose a laquelle on pense en lisant information ) étant donné les moyens qu'on a en lycée.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

2/A ce propos, comment se fait il que l'extraction de l'ADN, qui utilise quand même des procédés assez violents il me semble. choc osmotique+centrifugation, ou détergent+sels+réaction de précipitation), ne change pas la conformation qu'il avait initialement dans la cellule.  [...] 6/ Dans d'autres chapitres, on nous parle souvent de l'observation d'un gène pour lequel on a forcé l'expression. mais comment procède-ton. on injecte de l'ADN répliqué (par PCR, ou autre technique de génie génétique) dans un noyau de cellule.  [...]

[Biochimie] Précipitation des protéines après fractionnement sur gradient de sucrose

Ma question est. quelle est selon vous le type de précipitation le plus adapté pour ce type de manipe Est ce que quelqu'un a déjà eu besoin de procéder à ce genre de précipitation.  [...] Pour ceux que cela intéresse (s'il y en a), la précipitation chlorforme/méthanol a bien fonctionnée, et est apparament la meilleure pour un gradient de sucrose.  [...]

Precipitation adn plasmidique

La precipitation peut meme se faire a temperature ambiante (la tp° n'influence pas la precipitation contrairement a certaine croyance).  [...] Effectivement ca n'influence pas la précipitation. Je pense que ces croyances sont basées sur le fait que lorsqu'on congèle a -20°C, on obtient une sorte de précipité visible à l'oeil nu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] J'utilise le kit RNeasy Mini. Il est prévu pour extraire les ARNs à la base mais on peut aussi récupérer les protéines dans le tampon RTL. Il suffit juste de faire une précipitation à l'acétone.  [...]

précipitation des protéines

que veut dire la précipitation des protéines et que veut dire la demi saturation des protéines car on dit que les globulines précipitent à 50% de saturation et l'albumine à +de 50% de concentration dans le sulfate d'ammonium. Que cela veut il dire.  [...] en fait la précipitation des protéines arrive lorsqu'il y a une faible solubilité de la protéine dans la solution. En concentration faible de sels dissouts dans la solution, (donc faible force ionique) les sels interagissent avec les radicaux des protéines et aident à leur dissolution, or qu'en forte concentration saline, tout change, en effet, il n'y a plus assez de éluant (pris par les sels) donc les protéines se regroupent, on dit qu'elles précipitent (relargage).  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.   [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.   [...]

Cancer

Toutes les masses ne sont pas des cancers, certes. Mais un seul mot d'ordre. faites contrôler. palpation, radio, échographie ou scanner, c'est selon. Si l'image est suspect, faites faire des analyses complémentaires et consulter un spécialiste. Certains cancers sont hormonaux dépendant, d'autres pas.   [...] Ne faites pas opérer sans l'avis d'un spécialiste. Un chirurgien pourrait ne pas demander les bonnes analyses de la pièce enlevée s'il s'aventurait par précaution... mais qui dans ce cas s'apparenterait à une précipitation.  [...]