• Forum - Précipitation, ADN, éthanol

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

J'aimerais savoir pourquoi le rendement de la précipitation de l'ADN dans de l'éthanol augmente lorsque l'on baisse la t°.  [...] Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution d'ADN "contaminante"?

Pour MaliciaR. ADN visqueux = culot après précipitation à l'Ethanol mal resuspendu, ou présence d'ADN génomique (volontaire ou non.). Pour aider, il est possible d'incuber @ 50°C pendant 10min pour aider à la resuspension. Dans le cas d'ADN génomique, on peut soniquer (tout dépend des applications que l'on veut faire après, mais 10-30s suffit largement).  [...] Sinon, j'ai extrait mes ADN à partir de tissus animaux lysés 3h à 55° au bain-marie, puis phénol/chloroforme avec des tubes contenant un gel bloquant la phase P/chlo (très pratique) et Éthanol précipitation avant de reprendre mon culot dans de l'eau.  [...]

milieu de culture

Pour l'ADN plasmidique, pas de protéase. À la place, précipitation par saturation alcaline. Centrifugation, conservation du surnageant et élimination du culot. Enfin précipitation à l'éthanol.  [...] Merci et excusé moi si j'ai trop exagéré oui pour la croissance comme je vous es dit toute a l'heure j'ai mis une préculture en ISP4 liquide (2ml) laissé incubé a 30°C pendant 48h avec agitation et après la mettre dans un milieu ISP2 + 10% saccharose et incubé a 30°C pour 48h avec agitation.   [...]

Visualiser l'ADN

purification puis précipitation de l'ADN dans l'ethanol. L'ADN apparait ainsi comme une pelotte blanche.  [...] Voilà deja pas mal de méthodes, de la plus directe à la plus sophistiquée (l'electrophorèse n'est pas compliquée mais elle est moins spontannée que les autres).   [...]

inhibiteurs de la qPCR

C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ). L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70).  [...] Svppp je veux une réponse a cette question.. comment est ce que avec une pcr ou une rt pcr on peut savoir s'il ya un cancer ou non autrement dit comment on procède pour analyser un échantillon avc une pc ou une rt pcr je veux comprendre le protocol ps. Chuui tres nulle en ce domaine de la bio mol svp j'aimerai bien que la reponse soit très claire et merci d'avance.   [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...]

[Biochimie] Types d'éthanol

Je ne comprends pas déjà comment l'éthanol peut être 99,8% et contenir 3% d'éther sulfurique...Et ensuite je me demandais les applications possible de ce genre d'éthanol est-il suffisant pour de la biologie moléculaire (précipitation d'ADN) ou ne convient-il que pour décolorer des gels ou nettoyer des surfaces de travail.  [...] Alors le nettoyage des paillasses, c'est de l'éthanol à 70%, et pour précipiter mes ADN, j'utilisais de l'éthanol 99,8% et ça fonctionnait bien. D'ailleurs les fournisseurs l'indiquent souvent comme qualité biologie moléculaire ou pour biologie moléculaire, utiliser un produit pour le diluer à 70% je trouve ça un peu ruineux quand même.  [...]

[Biologie Moléculaire] c'est quoi le rôle du formamide

je fais du séquençage d'ADN. Après la purification, la réaction du séquençage, la précipitation à l'éthanol, on mélange avec du formamide. Ma question c'est. c'est quoi son rôle.  [...] mais selon ce document c'est plutôt le contraire. le formamide déstabilise l'ADN et favorise sa dénaturation. non son utilisation serait donc dans le but d'avoir de l'ADN simple brin prêt à être séquençé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

L'ADN est issu d'un broyat de foie de rat, il a été purifié par une exctraction phénolique, une précipitation dans de l'éthanol absolu et une resolubilisation dans un tampon d'élution TrisHCL 10mM + EDTA 1 mM à pH 8.  [...] J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...]