• Forum - Plasmide, Quantité, Ratio

[Microbiologie] ligation clonage

En principe dans la formule de simple ligation (que tu peux trouver via google très facilement), tu tiens compte de la taille de l'insert, du plasmide et de leur quantité respectivement pour avoir le meilleur ratio insert/plasmide.  [...] merci pour votre coopération, juste j'aimerais bien savoir quand est ce que je peux utiliser les ratios 1.1, 1.5, et 1.3 (insert/vecteur) comment je peux savoir si les bouts sont cohésifs ou pas sachant que j'ai utilisé ECOR I pour traiter mon plasmide et l'ADN.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

C'est là qu'intervient le deuxième plasmide avec le gène de résistance. En fait, lorsque l'on fait une co-transfection, on considère que si le plasmide A entre dans la cellule, alors le plasmide B rentre aussi (en respectant un ratio équivalent).  [...] En fait, lorsque l'on fait une co-transfection, on considère que si le plasmide A entre dans la cellule, alors le plasmide B rentre aussi (en respectant un ratio équivalent).  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Aujourd'hui j'ai tenté de le faire sans kit (pour cause de restriction budgetaire) et en faisant un des proto donné dans un des forum (lyse alcaline) et j'obtiens plus de 2µg/µl de plasmides avec une bonne pureté (ratio spectro de 1.9) soit la même quantité qu'en utilisant une megaprep qiagen.  [...] J'aurais voulu vos avis sur la quantité de plasmide recupére qui moi me semble enorme.. ou alors les kits qiagen sont très mauvais.  [...]

Après les fêtes ...

Enfin, pour un individu jeune avec activité physique normale et régulière, faut-il impérativement consommer des protéines tous les jours et en quelle quantité (y a t il un ratio en g/g de poids corporel ) Que pensez-vous des protéines végétales telles que le soja (qui ne contiennent pas tous les acides aminés essentiels tels que la lysine, méthionine).  [...] Enfin, pour un individu jeune avec activité physique normale et régulière, faut-il impérativement consommer des protéines tous les jours et en quelle quantité (y a t il un ratio en g/g de poids corporel ).  [...]

[Biotechnologie] Sonde ratiométrique

Si je me souviens bien, la mesure avec ce type de sonde est plus spécifique. Elle permet de mesurer la quantité de calcium, en mesurant l'absorbance à deux longueurs d'ondes différentes, l'une est directement dépendante de la quantité de calcium, l'autre en est indépendante.  [...] Pour cette 2eme, si tu as plus d'aborbance, ce sera lié à la quantité de sonde en elle-même, et pas à la quantité de calcium. En faisant le ratio des 2 valeurs obtenues, cela permet de normaliser ta valeur par rapport à la quantité de sonde qui est entrée dans la cellule, et de s'affranchir d'un bruit de fond si tu préfères.. J'espère avoir été claire. Bon courage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Je profite de ce topic autour du page-sds pour vous demander un éclairage de ma lanterne s'il vous plaît. Nous avons évoqué cette technique de séparation des protéines selon leur masse dans le cadre de mon master 2, mais les protéines étant de composition en acides aminés différente, avec ce que ces derniers peuvent avoir de fonctions acides ou basiques différentes, je n'arrive pas à comprendre comme la charge globale d'une protéine dénaturée au page sds peut être la même entre deux protéines différentes.  [...] Sinon, attention, le ratio que j'ai indiqué est determiné pour un lysat cellulaire. Donc une mixture complète protéique dont on ne sait pas trop de quoi c'est composé. Il est possible de calculer le ratio quantité SDS/quantité protéine (si la protéine est purifiée par exemple).  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

SInon une autre piste. le cerveau est plein de lipides, il faut peut être changer le ratio trisoc chloroforme.quantité de tissu.  [...] non, si tu ne mets pas trop de tissu, et si'l est bien homogénéisé, il n'y a pas besoin. Ma collègue a testé plusieurs quantités de chloroforme, et en mettre trop altère le rendement. Quelle est la taille du morceau que tu broies (ou la masse).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Pour le clonage 1, j'essayerai de faire une ligation overnight, peut-être qu'en 1h c'est un peu short pour avoir assez de plasmide ligué.  [...] De plus j'ai vérifié si mes enzymes coupaient en comparant sur gel un plasmide digéré et non digéré (ya pas photo ça coupe). J'ai même essayé de religué et ca me donne rien (donc pour les dig je crois que c'est bon).  [...]

clonage

Slt, alors oui amplification avec bon rendement du fragment désiré. purification ok avec un bon rendement égalment. Ensuite on a digéré le fragment PCR et notre plasmide avec les memes enzymes. On a testé différentes choses mais rien n'y fait. On n'obtient pas de clones satisfaisants.  [...] Ensuite, une purif et la meme chose avec la 2 eme enzyme, puis Re-purif, puis ligation O/N (perso j'utilise pas plus de 20 ng de plasmide avec un ratio compris entre 3/1 et 10/1).  [...]

Clonage dans un vecteur

Merci de ne pas poster plusieurs fois le meme messages a des endroits différents et de créer une discussion spécifique plutot que de poster vos messages dans des discussions sans rapport. Yoyo.   [...] On pourrait presque dire que chaque clonage est différent. il y a pas mal de paramètres à prendre en compte. taille de l'insert, taille du plasmide, technique de transfo, conditions de ligation (ratio insert/vecteur, température, durée, Unités de ligase, bouts francs, cohésifs), etc. etc.etc.  [...]