• Forum - Plasmide, Origine, Réplication

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...] En s'appuyant sur ces informations, on a démontré ces topologies au niveau des ARS portées par différents plasmides (Brewer et al., Cell, 1987) et on a établi que les ARS sont bien des origines de réplication. (Je passe très vite ici pour deux raisons. 1.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

Je ne pourrais pas affirmer que tous les procaryotes n'ont qu'une seule origine de replication mais en tout cas E.coli (bactérie représentative et très étudiée) n'a qu'une seule origine de réplication.  [...] Les études réalisées avec le plasmide ori C permettent de comprendre quelles sont les étapes de l'initiation à l'origine de réplication de E.coli. Schématiquement, ces étapes sont.  [...]

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

J'aimerai savoir si il était possible d'ajouter une origine de réplication et tout de suite après un marqueur de sélection afin de pouvoir sélectionner des clones.  [...] tu peux songer a foutre une origine de réplication virale type SV40 par contre je sais ce que ca donne en système de production.  [...]

biologie moleculaire

voila j'ai une question qui conserne les vecteurs de clonage, on a étudié les plasmides, les phagemides, les bacteriophages et les cosmide (j'espere que je n'en ai pas oublié...) et le prof nous a demandé de lui construire un vecteur de clonage complet je ne sais pas s'il suffit juste d'additioner tous les elements qui, a mes yeux, sont interessants.  [...] - Une molécule capable de se répliquer, comme celle que tu as cité. C'est le premier critère. En fonction de tes besoin, tu vas choisir une molécule qui peut se répliquer en grand nombre de copies (plasmide avec origine colE1 de réplication, ou oriC) ou en nombre moindre (p15a).  [...]

[Biologie Moléculaire] Maxi-prep avec rendement très faible

Je viens à vous car depuis pas mal de temps je suis confronté à un problème assez embêtant. il se trouve que de nombreuses maxi-prep que j'effectue ont un rendement très faible (masse finale de 40ug). J'ai pu remarquer que je n'obtiens ces rendements que pour des bactéries possédant le plasmide pCDNA3 (indépendemment de l'insert).  [...] Je m'auo réponds. en fait mon plasmide possède une origine de réplication pbr322 en faisant un plasmide a faible copie dans chaque bactérie. donc je dois suivre les protocoles pour les plasmides low copy, ce que je ne faisais pas.  [...]

origine de réplication

Tout simplement un plasmide a une origine de réplication propre et il est capable de se répliquer de façon autonome.  [...] Après aussi tout dépend des séquences d'incompatibilité de ton plasmide. Notamment chez les bactéries lorsque 2 plasmides présentent les mêmes séquences d'incompatibilité (même si ces plasmides codent pour des gènes différents) l'un des deux va disparaître c'est la cure plasmidique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Les plasmides

Je m'interroge sur mon cours de biologie moléculaire et notamment sur les plasmides. Je me demandais si un ADN pouvant se répliquer chez une bactérie pouvait s'y maintenir pareil chez l'eucaryote ( là j'ai des doutes mais je ne sais pas comment l'expliquer).  [...] Ils sont composés d'une origine de réplication qui permet la réplication d'une plasmide sans entraîner le chromosome bactérien à se diviser (gain d'énergie) et ont très souvent un gène qui code pour un antibiotique ce qui permet aux bactéries de lutter contre les pathogènes de l'environnement.  [...]

[Génétique] exprimer une protéine dans E.COLI

Ensuite, tu l'insert dans un plasmide, possédant une origine de réplication E.Coli, avec un gène de sélection (ex.. Résistance à lampiciline).  [...] Dailleurs, je rajouterai aussi que si ton but est la production de protéines, les procaryotes c'est pas tip top car ils ne vont pas faire les modifications pos traductionnelles nécessaires, donc tu peux essayer de produire la protéine dans une cellule de levure, mais les modif' post-trad n'y sont quand meme pas géniales.   [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour choisir un vecteur, il te faut regarder la force de l'origine de réplication (qui détermine le nombre de copies de plasmide dans la bactérie), les résistances aux antibiotiques (sélection des bactéries intégrant le plasmide), la présence d'autres marqueurs de sélection comme la beta-galactosidase, le type de système d'expression (promoteur euca/procaryote, RBS pour traduction chez procaryote,  [...] pBR322 est vraiment le vecteur de base. C'est je pense, le premier que l'on a du vous présenter. C'est un vecteur de clonage qui contient simplement. une ori de réplication, un gène de résistance (Amp r pour les procaryote, Tet r pour les eucaryotes), et une cassette de clonage.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

7) Lors de l'utilisation d'agrobacterium tuméfaciens, on crée un plasmide contenant un gène de résistance pour E.Coli et pour la plante, une origine de réplication E.Coli, une origine pour Agrobacterium, et puis deux séquence front gauche et front droit dans lequel on retrouve le gène d'intérêt ainsi qu'un gène de sélection pour la plante.  [...] L'amplification est meilleur dans les coli c'est certain mais si le coeur vous dit de travailler uniquement dans une levure rien ne vous en empêche du moment que votre plasmide possède une origine de réplication eucaryote.  [...]