• Forum - Plasmide, Bactérie, Intérêt

isolation d'un plasmide

S'assurer que la bactérie ne possède pas de plasmide avant la transformation Et bien en principe, elles ne possèdent pas le plasmide d'intéret (logique). Tout autre plasmide nous est indifférent. Ce que l'on fait en pratique, c'est que l'on verifie après coup que les bactéries que l'on a selectionnées portent bien l'insert d'intéret (digestion de restriction, séquencage).  [...] Le fait qu'un plasmide existerait déjà dnas la bactérie ne va t'il pas diminuer la probabilité que celle ci incorpore notre plasmide d'intérêt.  [...]

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

En effet j'aimerais savoir si quelqu'un peut me dire comment on peut créer une bactérie (E.coli) bioluminescente à partir d'une quil'est naturellement(opero, plasmide..). J'aimerais avoir pas mal d'nfo aussi sur comment cette nouvelle souche est induite par un métal et donc émet de la lumière.  [...] A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...]

[Biologie Moléculaire] Librairie de génes !!

Bonjour tout le monde, c'est quoi une librairie de génes elles peut être façonnées par des souches d' E.coli...merci bien.   [...] Pour moi c'est comme une banque de gènes. C'est à dire qu'on a trouvé à quoi le gène correspond et on le conserve dans une banque. Pour cela on introduit la séquence à l'aide d'un plasmide dans une bactérie souvent E.coli (parce qu'on l'aime bien.). Et puis quand on en a besoin, on décongèle et la bactérie se multiplie et amplifie la séquence d'intérêt que l'on récupère et voilà.  [...]

[Biologie Moléculaire] Opéron arabinose

J'utilise dans une expérience de fabrication d'une bactérie transgénique le plasmide pnil. Le gène d'intérêt est activé par l'opéron arabinose. Quel est le rôle de cet opéron Pourquoi choisir un opéron possédant 2 voies d'activation. l'arabinose et l'AMP cyclique.  [...] Ouiiiiiiiiii exactement sur internet y'a pas mal de sites qui parlent d'opéron lactose, arabinose et tryptophane ainsi que leurs régulations.  [...]

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel?

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel.  [...] On a un plasmide circulaire avec x propriétés, on l'ouvre par digestion à un endroit vierge (sans gène d'intérêt) et on l'insère dans une bactérie. Est-ce que ce plasmide (linéarisé) est encore fonctionnel Personnellement j'imagine qu'un plasmide tronqué ça fait un peu désordre puis bon on a quand même séparé une séquence en deux (toute séquence à un intérêt) en petit 2 je pense également que des exonucléases bactériennes pourraient l'éliminer.  [...]

PCR et vecteur de clonage

La bactérie pour se multiplier va répliquer son génome et le plasmide contenant le gène A. Au final tu obtients donc un plasmide d'expression, en grande quantité, et contenant le gène d'intérêt. Tu peux également récupérer la protéine A (synthètisée par la bactérie car codée par le gène A) dans ton milieu de culture.  [...] Donc il doit etre possible de calculer l'amplification en aprtant du postulat (faux) qu'une seule molecule transforme une bacterie. tu connais le nombre de plasmide par cellule, et le nombre de cellules dans une culture de 5ml alors cela te donne un nombre de molecules.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Avec le plasmide controle, la culture présentait un aspect habituel avec une solution LB trouble assez homogène. En revanche la culture avec le plasmide d'intérêt présentait de gros agglutinement de bactéries au fond de la bouteille en plus du LB trouble.  [...] ce peut il alors qu'en changeant de plasmide le résultat change et par conséquent si l'on effectue la transfection sur des bactéries des plasmides différents ayant tous les meme gene d'interret ( dans des expériences séparées sur la meme souche de bactérie) des résultats différents.  [...]

Ogm

j'ai cru comprendre qu'ils étaient inséré dans une bacterie E.coli vecteur de clonage pour se multiplier mais est ce que c'est les plasmides qui sont clonés dans la bactérie ou bien est ce que c'est la bactérie qui se reproduit tout simplement (question sans doute bete mais bon ).  [...] En fait les plasmides existe en plusieurs exemplaires dans la bactérie (selon la taille du plasmide et sont utilité ça peut aller de quelques exemplaires a plusieurs dizaines) mais c est surtout par la multiplication des bactéries que le nombre de plasmides est augmenté ensuite on fait éclater les cultures bactériennes et on récupère les plasmides d intérêt.  [...]

marqueurs de sélection

Si par exemple le marqueur était la production d'un pigment, il n'est même pas certains d'avoir assez de bactérie pour obtenir des colonies de la couleur adéquates si les 1% transformées de l'inoculat sont inhibées par chimiotactisme - auquel cas après croissance on peut très bien tomber à 0,1% ou même 0,001% de cellules transformées au sein de notre culture résultante.  [...] Le gène d'intérêt est inséré dans un plasmide, c'est ce plasmide qui contient le gène qui permet a la bactérie de survivre dans le milieu de selection.  [...]

[Génétique] Gène inconnu

Tout ce que tu en tireras c'est qu'en transfectant la bactérie avec un plasmide contenant le gène d'intérêt pour peu que tu arrives à l'amplifier, le cloner etc. (et toutes ces manips ne sont pas gratuites, vas te falloir le matos pour le faire), tu observeras qu'elle pète aussi bien à 100° que sans le plasmide.  [...] En oubliant la thermostabilité, ne serait il pas plus simple de prendre une lignée de bactérie possédant un plasmide codant pour un quelconque rapporteur (résistance à un antibio, Lacz, Luc, etc...). C'est exactement le même projet, sauf que cette fois ci, il est réalisable.  [...]