• Forum - Plasmide, ADN, Origine, Réplication, Bactérie

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

je suis actuellement en première année de licence en biologie et nous avons étudié les plasmides mais je n'ai pas tout compris notamment sur la carte de réstrction. Quelle est son principe et qu'est ce qu'un site de réstrction, une origine de réplication, un promoteur et un terminateur.  [...] Le plasmide étant constitué d'ADN tu as besoin d'une origine de réplication afin de permettre aux polymérases de le reproduire dans la bactérie. Si le morceau d'ADN ajouté code pour une protéine, la présence d'un promoteur et d'un terminateur te permettra d'activer la production de la protéine à partir du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Maxi-prep avec rendement très faible

Je viens à vous car depuis pas mal de temps je suis confronté à un problème assez embêtant. il se trouve que de nombreuses maxi-prep que j'effectue ont un rendement très faible (masse finale de 40ug). J'ai pu remarquer que je n'obtiens ces rendements que pour des bactéries possédant le plasmide pCDNA3 (indépendemment de l'insert).  [...] Je m'auo réponds. en fait mon plasmide possède une origine de réplication pbr322 en faisant un plasmide a faible copie dans chaque bactérie. donc je dois suivre les protocoles pour les plasmides low copy, ce que je ne faisais pas.  [...]

[Biotechnologie] ADN recombinant réplication dépend du cycle cellulaire ?

Le plasmide (vecteur) qui fait partie de l'ADN recombinant sera injecté dans le cytoplasme d'une bactérie comme e.coli et donc la réplication de l'ADN recombinant sera dépendant du cycle cellulaire ou non.  [...] Selon les bactéries et les vecteurs utilisés, la réplication plasmidique est indépendante de la réplication chromosomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Colonies de bactéries

Je suis actuellement entrain d'effectuer une modification de BAC par recombinaison homologue dans la bactérie DH10B. Je viens de transformer mes bactéries qui contiennent le BAC avec le plasmide contenant la séquence que je veux insérer dans ce BAC. Après l'electroporation, mes bactéries ont poussées sur un milieu contenant des antibiotiques appropriés montrant que certaines ont bien intégrer le plasmide et que celui ci a du s'intégrer dans le BAC (le plasmide contient une origine de réplication qui ne lui permet pas de se répliquer de façon autonome dans ce type de bactéries).  [...] Malheureusement il me semble (à confirmer) que les BAC possèdent une origine de réplication OriS qui maintient le nombre de copies à 1 par cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour choisir un vecteur, il te faut regarder la force de l'origine de réplication (qui détermine le nombre de copies de plasmide dans la bactérie), les résistances aux antibiotiques (sélection des bactéries intégrant le plasmide), la présence d'autres marqueurs de sélection comme la beta-galactosidase, le type de système d'expression (promoteur euca/procaryote, RBS pour traduction chez procaryote,  [...] pBR322 est vraiment le vecteur de base. C'est je pense, le premier que l'on a du vous présenter. C'est un vecteur de clonage qui contient simplement. une ori de réplication, un gène de résistance (Amp r pour les procaryote, Tet r pour les eucaryotes), et une cassette de clonage.  [...]

plasmide

Les bactéries possèdent leur matériel génétique sous forme d'un chromosome circulaire. Prends une bande de papier, écris un code génétique dessus ( ) et fais en un anneau avec du scotch. tu as un chromosome bactérien, dont le scotch serait par exemple l'origine de réplication (l'endroit ou va commencer le processus de copie de l'ADN lors de la division cellulaire).  [...] Un plasmide peut se comparer à un mini chromosome bactérien. c'est un petit bout d'ADN circulaire, comportant des informations génétiques et une origine de réplication.  [...]

cellules souches

Pour une définition simple et accessible à tout péquin, comment s'y prend-on pour cultiver de telles cellules, aspect pratique, basique.   [...] Un plasmide est une molécule d'ADN circulaire capable de se multiplier de manière autonome dans un organisme procaryote ou eucaryote. Il possède une origine de réplication, un gène de sélection et généralement de multiples sites de clonage pour y insérer un fragment d'intérêt. =. définition de FS.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression transitoire

Oui il y a expression de ton plasmide sans séquence Ori car cette séquence est nécessaire pour la réplication du plasmide et c'est une origine de réplication procaryote lorsqu'on fait des expressions transitoires car on produit les plasmides chez E. coli. Pour initier la transcription on utilise la plupart du temps le promoteur fort du cytomégalovirus (CMV) que l'on place en amont de la séquence codante.  [...] Et dernière chose, pour la production des plasmides dans des bactéries, il ne faut pas qu'une origine de réplication procaryote (Ori) mais aussi des séquence codant un ou plusieurs gènes de résistance à des antibiotiques (habituellement 2) pour sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu de culture contenant les antibiotiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Les gènes codant pour une resistance à l'ampicilline par exemple permettent de sélectionner les bactéries qui ont reçu le transgène. Mais pour ce qui est de l'amplification pour obtenir de grandes quantités de plasmide, c'est tout bête mais l'origine de réplication permet de répliquer le vecteur dans une même bactérie ou bien chez les cellules filles aprés mitose.  [...] Et enfin dans un exercice on introduit un vecteur viral par voie intraveineuse et on observe que les différents tissus de l'organisme n'expriment pas la même quantité de protéine recombinante. En fait si je comprend bien on a injecté un virus portant le gène d'interêt dans l'organisme ce qui va permettre d'injecter le matériel génétique dans la cellule hôte Dans ce cas comment expliquer les variations observées Est-ce que c'est dû au fait que le virus n'infecte qu'un type paarticulier de cellule.   [...]

Carte plasmide pcDNA 3.1

Je sais que les ori servent à initier la réplication, mais je croyais qu'un plasmide se répliquait d'un seul coup et toujours à partir du même endroit, donc pourquoi il y a 3 ori différentes (SV40ori, pUCori, f1ori) Et SV40pA qu'est ce que c'est.  [...] SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines.  [...]