• Forum - Phase, Sites, Restrictions

[Biochimie] Gfp

Est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer comment on utilise la GFP pour marquer une proteine que l'on veut localiser Peut on marquer la proteine directement ou est on obligé de faire une fusion entre le cDNA et la GFP.   [...] Il existe plusieurs plasmides qui contiennent déjà la séquence codante pour la GFP en phase avec des sites de restrictions permettant de cloner le cDNA. En gros, ça ne change rien par rapport au clonage dans un vecteur d'expression basique en terme de manip'.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Tout a fait, si tu as une carte de restriction tu peux couper a la base pres. Il faut juste avoir un site bien placé. Comme ça tu peux supprimer la fin de ton ADNc et le rabouter a ton autre gène, sous réserve de sites de restrictions bien placés sur l'un et l'autre des fragments et qui permettent un assemblage en phase.  [...] Je ne sais pas quel vecteur tu veux utiliser, mais il existe des centaines de vecteurs commerciaux qui comportent tout ce qu'il faut, dont un MCS ( multi cloning site ) entre le promoteur et le terminateur. Ce site contient une grande quantité de sites de restriction et permet d'insérer facilement ce que tu veux. (voir image).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ajout de sites de restrictions

Ce qu'il faut faire c'est simplement prendre votre ORF et l'amplifier par PCR en ajoutant aux amorces les sites de restrictions+ 6 nucléotides aléatoires.  [...] En ce qui concerne pGEMT, il s'agit d'un vecteur pensé pour y cloner directement des produits PCR sans digestion de restriction ni ajout de sites.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

j'ai pas encore bien cerné le rôle du polylinker.s... je suis désolé mais quel est l'interet alors d'avoir une zone comportant un nombre important de sites de restrictions.  [...] - si ton insert se trouve dans un fragment d'ADN bordé de sites reconnus par les mêmes enzymes, tu vas pouvoir isoler ce fragment de ton ADN de départ (par restriction) et le coller (ligaturer) dans ton vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment design des amorces PCR..

1. Faut-il compter les bases des clamps et des sites de restrictions pour calculer la Tm (les prendreen compte fait tout passer au dessus de 60 et c'est pas super sur le papier..).  [...] Pour l'histoire des sites de restrictions là par contre... J'ai pas compris l'histoire de retourner les sites... ils sont dans le bon sens tes sites. Par contre si rien d'autre ne te choque alors là tu as un problème.  [...]

Clivage par TaqI et HhaI

Si 2 sites de restrictions sont successifs, alors l'enzyme de restriction ne va pouvoir cliver qu'un site (au hasard..) entre les 2.  [...] Je souhaiterai savoir quel est l'intervalle min entre 2 sites de restrictions pour que l'enzyme coupe au niveau des 2 sites.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

On digerait alors le plasmide et l'insert par des enzymes différentes A et B générant des sites de restriction non compatibles.  [...] ici le plasmide a deux sites de restrictions différents mais identiques aux deux sites de reastriction de l'insert je ne sais pas si j'ai été claire en gros.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage - Page 2

Tout simplement car il n'y a aucuns sites de restrictions (qui puissent convenir) aux alentours...les deux sites de restrictions que j'ai besoin de placer aux extremités servent a isoler les cassettes que j'ai besoin de recuperer si je m'ecarte je vais amplifier au passage donc des parties que je n'ai pas besoin et qu'il me sera dur d'enlever apres.  [...] je suis bien d'accord, mais ces sites vont etre au niveau des morceaux de genes aux extremités que je ne veux pas donc certes apres restrictions ils seront amputés et donc pas fonctionnel mais il y aura toujours des morceaux donc c'est pas très propre, les deux sites uniques que j'ai mis juste pour cadrer la sequences que je veux ont ce role, d'eviter d'avoir les parties aux exterieurs.  [...]

[Biochimie] Structure palindromique

En ce qui concerne les enzymes de restriction, elles reconnaissent les sites de restrictions. Ces sites ont une structure palindromique.  [...] On m'a dit en cours que c'était ton premier exemple que les enzyme de restriction reconnaissent. Ils se lient donc sur un brin ou sur l'autre sans distinction.  [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel clonage

connaissez-vous un logiciel permettant d'ajouter des sites de restrictions sur une séquence un logiciel de préférences gratuit.  [...] Enfête ce que je trouve chiant c'est de devoir regarder sur un catalogue et de plus j'ai toujours du mal à rajouter mon site de restriction sur mon primers reverse(je dois faire fonctionner mes neurones pendant au moins 10 min.) c'est pour sa que je pensais à logiciel qui ajoute direcetement les sites de restrictions.  [...]