• Forum - Page, Séparation, Protéine

Sds-page

en général pour une application donnée on ne change pas le ratio acryl/bisacryl, d'ailleurs il se vend maintenant de plus en plus pré-mélangé.   [...] Par contre la concentration totale est le facteur clé qu'on modifie en fonction de la taille des protéines qu'on veut observer, en SDS page en général de ~7% (pour les grosses protéines, 200-400kDa) a 12-14% (pour les petites protéines, 5-15kDa).  [...]

problèmes gels SDS PAGE

J'ai actuellement un petit problème avec mes gels SDS PAGE, ils sont très moches même le marqueur moléculaire. on ne voit rien surtout au niveau des PM élevés là où je devrai voir ma protéine. Est-ce que quelqu'un peut me donner un protocole détaillé. gel de concentration à environ 3,5%, gel de séparation à 8%, traitement des échantillons... ou bien me diriger vers un lien.  [...] merci à vous, j'ai déjà tout refait et effectivement le problème vient peut etre du tampon de migration car les gels ont commencé à ne plus etre beau lorsque j'ai utilisé un tampon commercial.   [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] séparation des proteines par Electrofocalisation

je suis en 1er année de medecine, j'aimerai savoir si, quand on parle de séparation des proteines par éléctrofocalisation, on parle seulement de procédés qui mettent en jeux la charge, càd soit la chromatographie d'échange d'ion ou l' electrophorese Bi-dimensionnelle, ou si on parlait aussi de l'electrophorese monodimensionnelle càd sds-page sachant que cette méthode ne joue que sur la taille de la proteine.  [...] Non, le SDS-Page n'a rien a voir avec la charge, puisque par définition on migre en s'affranchissant de la charge des protéines.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

protéomique

La technique permet la séparation des protéines et l'obtention de profils très semblable aux profils de gel 2D classique, sauf qu'ici à la place des bandelettes de l'IEF, on utilise un gel 1D (SDS PAGE par exemple), on coupe la bande qui nous intéresse, puis on la fait migré sur un autre gel toujours en 1D.  [...] Il y a plusieurs possibilités. Par exemple on peut déposer des protéines issues de complexes obtenus par EMSA (=gel retard, gel shift). Cela permet de caractériser une interaction protéine-ADN.  [...]

[Biochimie] Sucrose

Es tu sûr de la dénomination N'est ce pas plutôt une séparation sur gradient de sucrose par ultracentifugation, suivie d'une séparation des différentes fractions par SDS-PAGE.  [...] Je pense également que c'est un centrifugation sur gradient de sucrose et après il faut déposer sur gel SDS-PAGE pour voir le contenu des différentes fractions du gradient.  [...]

[Biochimie] electrophorese

je voudrais juste avoir un éclaircissement. la SDS page avec agent réducteur pont disulfure. est effectuer pour connaitre la masse molaire des protéine de mon échantillon, mais comme les protéines ne migrent pas intact à savoir qu'elles sont dénaturées ce sont les chaines polypeptidiques qui migrent selon leurs masses moléculaires.  [...] autre éclaircissement on dit que l'électrophorese sert a la séparation des macromolécules biologiques. je n'ai vu l électrophorèse qu'associer a la séparation de protéine. Mais pour les lipides ou glucides je ne voit pas comment se passe l électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...]

[Biochimie] Protéine hydrophile ou hydrophobe ?

En faisant, par exemple, une électrophorèse 1D de séparation de charge, tu pourras savoir si ta protéine est GLOBALEMENT chargée positive (la protéine migre vers la borne -), négative (vers la borne +) ou neutre (pas de mouvement, elle reste au centre de ton gel).  [...] oui plus la protéine est affine pour l'eau et plus elle est hydrophile. mais le GRAVY va plutôt regarder le caractère hydrophobe donc celui définit comme +. après ce n'est qu'une indication globale et statistique, tout dépend de la forme de ta protéine, les AA exposés etc.  [...]