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[Biochimie] purification poids moléculaire

bonjour. Je puriife une protéine, mais c'est étrange, car même purifiée, en gel filtration j'ai 2 pics (l'un à env 300kDa, l'autre à env 185kDa). Pour les 2 pics j'ai aussi 2 bandes en SDS-PAGE. J'ai un peu de mal à l'interprêter je dois dire.  [...] Mais je propose, et j'attends vos commentaires, que les 2 bandes en SDS-PAGE soient en fait la même protéine avec un légère différence (post-traductionnelle), et donc j'aurais un homotétramère.  [...]

Immunoblot

C'est tout à fait ça. Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité). C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...] La migration à traver le gel va dépendre de l'encombrement stérique de la protéine (et donc de sa masse moléculaire). plus la protéine est petite/légère plus elle va migrer loin, plus elle est grosse/lourde et moins elle parcoura de distance après avoir été déposée sur le gel.  [...]

[Biochimie] Protéines SDS PAGE

est-ce que une bande sur gel SDS PAGE (pour séparer les protéines totales) correspond à une protéine ou peut être peptide ou peut être des protéines fragmentées.  [...] Ca dépend du type de gel utilisé. Dans le cas de gel dénaturant, on a des protéines fragmentées (ex. anticorps chaine lourde + chaine légère). Sinon on peut avoir une protéine complète.  [...]

Lecture graphique éléctrophorèse

Merci pour votre aide en tout cas... pour la seconde question quel est votre avis étant donné que c'est faux, cela veut donc dire que la cellule comporte + de proteine légère que le noyau. si on regarde la radioactivité ça va à l'encontre de cette réponse.  [...] Pour les extraits nucléaires. en ramenant au total de protéines nucléaires, la part de protéines légères (sous 20 kDa) = environ 1/3 des protéines nucléaires totales.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Là où je suis vraiment perturbé c'est que j'ai un peu le même problème que toi avec une protéine. Les Ig fonctionnent en IHC mais pas en western. En revanche ça fonctionne en dot-blot (non dénaturant donc) ou en IP. Du coup pour moi c'est vraiment la dénaturation du western qui pose problème.  [...] Par rapport au paradoxe des résultats, ce ne serait pas la premiere fois qu'un ligand active la dégradation d'un messager ou de sa protéine alors que l'on note une légère augmentation de la trancription. En fait, concernant l'ARNm tout réside dans ce qu'elle appelle taux d'ARN (voir mon post précédent).  [...]

Quelques questions sur les neurones

Pour la contraction, il faut que la concentration intracellulaire de calcium augmente. Le calcium dans cellule musculaire agit sur le troponine qui est une protéine bloquant le contact entre l'actine et la myosine. L'ion calcium se fixent sur la troponine, ce qui induit un changement de configuration spatiale de cette dernière permettant ainsi le contact entre l'actine et la myosine donc la contraction.  [...] La calcium active aussi une autre protéine, la calmoduline qui stimule l'activité de l'enzyme MLCK. Cette enzyme stimule la contraction en phosphorylant la chaine legère de myosine.  [...]

clathrine

Les rôles de la chaîne légère de clathrine sont multiples. Elle est une protéine de structure en tant que sous-unité de la clathrine qui, agencée en trimère et regroupée en grillage protéique, constitue l'armature externe des vésicules clathrine-dépendantes (Lodish et al.  [...] Dans les cellules hépatiques, la chaîne légère de clathrine se lie avec une enzyme cytosolique particulière appelée chaperon protéique hsc70, qui dépolymérise les cages de clathrine en ses unités de triskélions, une réaction ATPasique. Il a été montré que les chaînes légères de clathrine purifiées stimulent l'hydrolyse de l'ATP par hsc70 (Kirchhausen, 2000).  [...]

[Biochimie] test bradford et acides nucléiques

ainsi, dans ma solution protéique on observe bien une coloration bleue. Cependant, on observe également une légère teinte bleue au niveau de ma solution d'acides nucléiques. Par conséquent j'aurai souhaité savoir quels protéines pourraient être associées à ces acides et dont présentes dans ma solution.  [...] les acides nuléiques peuvent être associés à des histones, ils ont surement été purifiés avant et c'est pour celà qe t'as une légère coloration peu intense, c'est les protéines qui subsistent aprés purif (enfin je crois, si je me trompe, d'autres le rectifiront surement).  [...]

[Zoologie] Destruction de nid de frelons

Le mieux pour vous serait d'arriver à procéder sans insecticides...et à votre place j'éviterais de m'apporcher trop (les gants en cuir me semblent une protection bien légère).  [...] - En cas de piqûre, ce qui est efficace et un peu douloureux (mais moins que la piqûre), c'est de se brûler l'endroit où elle est. Juste brûler jusqu'à ce qu'on resente la brulure, que ça fasse un peu mal quand même et de suite arrêter. En effet, le principe actif d'un venin est une protéine qui se dénature facilement avec la chaleur, on neutralise donc son effet.  [...]

[Immunologie] Lympho B et exclusion allélique.

Durant le développement de la cellule B le réarrangement produisant la chaine lourde s'effectue avant le réarrangement produisant la chaine légére. Si la chaine lourde produite et pertinente, le réarrangement de la chaine légére s'enclenche alors et exclusivement sur le même alléle.  [...] A l'inverse si le réarrangement de la chaine lourde n'est pas pertinent, le lympho B utilise son second alléle pour réarranger ses segments. Si la chaine lourde produite et pertinente de la même maniére la production de la chaine légére s'enclenche SUR LE MEME alléle.  [...]