• Forum - Molécule, Intérêt, Enzyme, Couple

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

De ce que je me rappelle les deux termes évoquent la même chose. Et le test ELISA en est un bel exemple. On peut mettre en évidence la présence d'une protéines, Ag, etc... d'intérêt à l'aide d'anticorps primaire, secondaire couplé à une enzyme dans le cas de l'ELISA.  [...] Pose de l'anticorps primaire,rincage, anticorps secondaire couplé à une enzyme, rincage. Ensuite, tu ajoutes le substrat et atteint que la réaction se fasse. Si ta molécule d'intérêt était présente et que tous les autres Ac ont réagi alors l'enzyme couplé au secondaire réagit avec le subtrat et ta solution devient jaune.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorp anti-espece et Western Blot

Dans le western blotting, tu vas effectivement utiliser deux anticorps distincts. L'anticorps dit primaire (que tu as nommé AC1), et l'anticorps qui sera dirigé contre la protéine que tu souhaite mettre en evidence par le western blotting. Cetr anticorps aura été produit par immunisation d'un animal en utilisant la protéine d'intérêt comme antigène.  [...] L'anticorps secondaire (que tu as nommé AC2) est celui qui va te permettre de mettre en évidence la réaction AC1-protéine d'intérêt. cet anticorps (AC2) sera couplé à une molécule qui permettra la révélation (en général l'enzyme HRP, peroxydase de raifort).  [...]

Immunohistochimie

- Pour démasquer l'antigène. immerger la lame dans du tampon Tris-EDTA buffer, pH 9.0, 0.05% Tween- 20*, et incuber à 95°C dans un bain-marie pendant 30 minut es. (Sinon adapter à votre protocole interne en gardant le pH requis).  [...] Les soucis les plus fréquents en IHC sont le décollement, lames silanées obligatoire, voir plus (pour mémoire la coupe tiens sur la lame grâce à des interactions de Van der Walls...). Viennent ensuite des problème de masquage des site antigénique non résolu par l'étape de démasquage.  [...]

[Biologie Cellulaire] Besoin d'explication sur le couplage chimio-osmotique ( mitochondries)

Le NADH est un coenzyme, c'est une petite molécule qui est couplé à certaines enzyme. Cc'est comme la dit ta prof une navette qui transporte des H+ et des électrons par la même occasion.  [...] De la même manière qu'un barrage hydroélectrique produit de l'électricité, l'ATP synthétase laisse passer 2 ou 3 ions H+ (je sais plus) de la matrice à l'espace intermembranaire et fabrique 1 ATP à partir d'ADP et d'un phosphate. (d'où le couplage chimio-osmotique).  [...]

Transports actifs avec perméase

Tout d'abord, ce n'est pas expliqué dans mon cours, mais concernant une pompe Na+/ATPase. le transport passif de Na+ est bien couplé à un transport d'une molécule donnée, devant rentrer dans la cellule non Car quel serait l'intérêt sinon.  [...] Et concernant la pompe Na+/K+-ATPase, c'est donc elle qui intervient suite à la dépolarisation/repolarisation d'une membrane cellulaire pour faire revenir les concentrations ioniques au point de départ.  [...]

[Biotechnologie] spectrometrie de masse

ce que j'ai compris c'est que la spectrometrie de masse SM permet de séparer les molecules (ici les peptides) selon leur masse. Ce que je ne comprend pas c'est comment avec la spectromrtrie de masse en tandem MS/MS on arrive a deduire la sequence en acides amines a partir des masses des peptides.  [...] Une protéine étant trop grosse pour être analysé en spectrométrie de masse simple (qui ne fait pas que séparer des molécules quand il est couplé à une HPLC mais qui établi aussi des spectres de fragmentations permettant de déduire la structure de la molécule), on trypsinise la protéine (on la coupe avec une enzyme), on la passe dans un spectrométre de masse qui va fragmenter les peptides en de plus petits fragments, à la sortie il y a un triage des fragments (grâce à une triple quadrupole) et à nouveau leur fragmentation par un deuxième spectromètre de masse pour faire des fragments encore plus petits et qui là vont pouvoir être captés et analysés par ce deuxième spectromètre de masse couplé à un ordinateur pour faire l'analyse du spectre de masse.  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Voilà, peux t-on faire une PCR sur un vecteur de clonage comportant le gène d'intérêt c'est pour le clonage d'une enzyme. Ils parlent de strands (anglais) de plasmides qui ont été amplifiés par PCR dans un premier temps mais je ne sais pas si c'est possible directement sur un vecteur de clonage Le gène d'intérêt est lié au gène GST (gluthation transférase).  [...] Ouaip justement, l'enzyme interagit avec son substrat. Il me semble que le probleme posé est sur le clonage de l'enzyme. POur savoir si l'enzyme a parfaitement ete cloné on prend l'extrait que l'on a obtenu suite aux experiences de PCR pratiquées et on pratique un double hybride avec cet extrait couplé au Db et le substrat couplé au AD.  [...]

[Biochimie] ATP Synthase et thermodynamique

Concernant l'ATP synthase, de ce que je sais elle utilise le gradient de protons entre espace intermembranaire et matrice mitochondriale pour synthétiser l'ATP. pour cela elle couple l'énergie potentielle relâchée par la circulation des H+ à une énergie mécanique, via la rotation de la partie mobile F1 de l'enzyme.  [...] L'ATP couple deux processus comme tu dis, le transfert de proton à travers la membrane mitochondriale interne et la production d'ATP à partir d'ADP. Le premier processus libère une énergie G1 tandis que le deuxième consomme une énergie G2. L'enzyme ne modifie ni G1 ni G2 mais elle les couple l'un à l'autre et en pratique on a un seul processus libérant une énergie (G1-G2).  [...]

[Biochimie] Bsa

je voudrais savoir pourquoi on utilise le BSA (boeuf serum albumine) couplé a des tampons phosphatés toujours dans les dosages et les extractions d'hormones, et je parle surtt des extractions d'hormones steroidiennes et leurs immunodosages.  [...] Immunochimiluminescence est un terme qu'on utilise pas très souvent (souvent pour faire joli ^^). Lorsqu'on fait un western blot ou un ELISA en utilisant des anticorps couplés à la peroxydase, c'est de l'immunochimiluminescence. Immuno parce qu'on utilise des anticorps, et chimiluminescence parce que l'anticorps est couplé à une enzyme (généralement une peroxydase) qui va transformer son substrat en une molécule qui va produire de la lumière.  [...]

simple neurone - Page 2

Certaines protéines G (pas toutes.) sont sensibles à l'action de toxines bactériennes qui peuvent les activer ou les inhiber en agissant sur la sous unité alpha...Par exemple, la toxine cholérique bloque alpha sous sa forme active associée au GTP, et ce de façon irréversible.   [...] Mais les toxines n'agissent pas directement sur le canal... enfin, à ce que je sache. Le canal est inclu dans le système mais je ne crois pas qu'un canal seul puisse être couplé ( sans enzyme intermédiaire ) à une protéine G...à confirmer.  [...]