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QCM - Immunoprécipitation

C-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 5kDa.  [...] D-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine C dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

J'ai un souci avec mon western blot sur SDS-Page, la migration et le transfert se sont bien déroulés, la première révélation de ma protéine d'intérêt s'était nickel.  [...] ...Dans le cas où les deux protéines ont des poids moléculaires suffisamment espacés, on peut couper la membrane entre les deux tailles attendues (grâce au marqueur de taille) et faire l'incubation de chacune des parties avec l'anticorps adéquat. Ou alors, si les deux protéines ont des tailles proches, il y a trop de risque de couper des bandes d'intérêt, donc on peut faire migrer deux gels en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] migration protéine sds page

J'ai réalisé une électrophorèse sds page mais j'ai laissé migré trop longtemps les protéines, cela a-t il une influence au niveau des bandes lors de la révélation.  [...] Pour compléter, si tu laisses migrer trop longtemps, les protéines les plus petites (celles du marqueur comprises) vont sortir de ton gel. Et tu ne les verras donc pas lors de la révélation vu qu'elles ne seront plus là, mais en train de nager dans ton tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vrai ou faux : Daltons et taille moleculaire

En SDS page, tu es en conditions dénaturantes. La densité de charge dans les protéines est considérée comme constante. Quand tu appliques un champs électrique, une protéine plus grande subira une plus grande force, mais il ne faut pas oublier qu'elle sera aussi plus lourde.  [...] Dans un SDS PAGE tu dénature la protéine qui devient dès lors linéaire. Mais tu ajoutes aussi du SDS qui est un détergent ionique qui va charger négativement l'ensemble de tes protéines. Du coup, la charge globale intrisèque de la protéine n'entre plus en jeu dans la migration, seule la taille compte.  [...]

[Immunologie] immunoblote

Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...] Pour le western c'est un transfert électrique des protéines alors que l'immunoblot c'est un transfert qui se fait sous vide de pression.  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] migration des AA proline glutamine

Je me demande si quelqu'un connait l'influence des acides aminés proline et glutamine sur la migration de protéine en condition dénaturante.  [...] Sinon, pour en revenir à ta question, ton résultat ne m'étonne pas trop en fait. La migration en WB SDS PAGE a lieu du fait de l'association de SDS (chargé -) à la protéine. Habituellement, on considère que le nombre de SDS associés à une proteine est fonction uniquement de sa taille mais vu la très faible diversité d'aa contenue dans ta prot, il n'est pas choquant qu'elle ne se comporte pas de la même façon que le marqueur de taille.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je partage entièrement les critiques déjà formulées. Toutefois, l'albumine sérique est de loin la protéine la plus abondante dans le sérum humain, on ne peut vraiment pas passer à côté de son identification sur un gel SDS-PAGE 12% standard. Les globulines alpha, béta et gamma sont largement minoritaires et sont nettement moins colorées sur le gel.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

Je fais migrer mes fractions sur un gel SDS-PAGE 15%, la migration ne migre pas droite par rappport à mon marqueur de taille, j'ai des trop grosse bande (non du à la quantité de protéine déposée) qui déborde c'est assez bizzarre auriez-vous une solution à mon soucis.  [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.  [...]

[Biochimie] DTT et WesternBlot

WesternBlot on ne peut pas plus classique. dénaturation des protéines 10min à 95°C dans du tampon de Laemli (contenant donc du SDS...). Bien sûr SDS-PAGE pour la migration... Donc en conditions dénaturantes.  [...] Le résultat peut être le maintien de la présence de la bande à 300 kDa ou pas. Si elle est toujours présente, cela veut dire soit que la formation de son trimère n'est pas dépendante d'un maintien de la structure 3D de l'interface de trimérisation par des ponts disulfures, soit que la bande à 300 kDa est une protéine ou un complexe qui n'a rien à voir avec sa protéine d'intérêt (bande non spécifique).  [...]