• Forum - Migration, Fragments, ADN

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Bonjour, merci. Oui bien entendu je sais ce qu'est une enzyme de restriction. Une enzyme de restriction reconnait un site de restriction généralement palindromique sur l'ADN une fois reconnu elle clive. Alors j'utilise un ADN de phage lambda c'est de l'ADN circulaire il me semble mais qu'elle est le rapport avec la migration et oui je sais aussi c'est quoi l'électrophorèse sur gel d'agarose c'est la migration de fragments d'ADN ( dans mon cas) du fait qu'on exerce un champs électrique l'ADN étant chargé négativement va migré du coté positive au niveau de la matrice d'agarose les fragments les plus courts migreront plus vite et plus rapidement mais sa m'aide pas pour l'analyse car on a des bandes linéaire et non pas circulaire.  [...] De plus comment savoir si mon fragments d'ADN a été digéré J'aurais plusieurs fragments Où est ce en fonction de la migration.  [...]

TPE sur l'ADN aide pour l'électrophorèse :)

Du coup les petits fragments d'ADN migrent plus vite et se retrouvent en bas du gel, alors que les grands fragments restent dans le haut du gel.  [...] Tu utilises des enzymes de restrictions (endo ou exonucléases) qui vont te faire pleins de petits bouts d'ADN. Tu vas faire migrer ces fragments d'adn sur membrane (électrophorèse) et tu vas avoir ce qu'on appelle un profil de migration électrophorétique.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant.  [...] Puis tu fais de même avec BalI. A force de recoupement, tu devras normalement te rendre compte qu'il ne peut y avoir qu'une position pour BamHI vis-à-vis de BalI et EcoRI. Tu pourras alors passer au trois fragments avec PstI.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

.En fait y'a pas eu de conjugaison,j'ai réalisé une digestion d'ADN avec cette enzyme et une migration PFGE,ensuite j'ai hybridé mes fragments avec les sondes.  [...] Un minichromosome, par définition c'est un petit chromosome. avec les télomères, un centromère, une origine de réplication, et quelques pseudogènes (éventuellement des gènes peut-être) mais qui est plus petit que les chromosomes présents dans l'espèce, et capables de ségrégé correctement.   [...]

TP sur les plasmides

On a comme modèle de référence donc un plasmide de type afa-3 d'E. coli. On a fait une simulation de digestion de ce plasmide, ce qui nous a donné plusieurs fragments de plasmide.  [...] Sur nos souches A,B et X on a extrait les plasmides, l'enzyme Pst1 les a digérée au niveau des gènes qui codent pour l'adhésine puis on a fait une électrophorèse sur gel d'agarose (on a donc une migration des fragments d'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] révélation RFLP

SI c'est une simple RFLP, je ne vois pas l'intérêt de la sonde. Une fois la digestion par l'enzyme effectuée, une simple migration sur gel d'agarose avec un argent marquant l'ADN devrait suffire à visualiser les fragments et à donner une bonne idée de leur taille.  [...] En fait, tout dépend de ce que tu veux faire avec ta RFLP, si c'est visualiser une différence de nombre de fragments ou de taille de fragment (différence de taille de l'ordre de quelques dizaines de paires de base, en-dessous ça devient peut-être plus délicat) ce que j'énonce doit fonctionner.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

en fait les plugs sont les échantillons préparés, pris en masse dans de la gélose et moulés avant d'être soumis à l'éléctrophorèse par champ pulsé. C'est un terme employé dans les protocoles de PFGE.   [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]

[Biologie Moléculaire] Temps de migration de long fragments d'ADN

Je pense pas pouvoir m'aider de la migration du bleu, il me semble avoir lu quelque part qu'il se comportait comme un fragment de 300 à 1000 pb.  [...] Pour les grands fragments il faut passer par une électrophorèse en champ pulsé pour les séparer convenablement dans un gel d'agarose. Pour le gel il me semble évident qu'il faut prendre le moins concentré, 0,5-0,6%. Le temps de migration c'est au feeling. Vous faites migrer une ou deux heures, vous regardez sous UV, si ce n'est pas bon, vous refaites migrer etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Question 1. on fait un southern. cette méthode est elle adaptée pour tous les types de mutation Quelle serai l'expérience la plus adaptée.   [...] Le southern est effectué pour analyser une partie du génome et ses modifications éventuelles. Il est fait avec de l'ADN génomique que l'on a fait digérer par EcoR1, et on a hybridation avec une sonde radioactive synthétisée par l'ADNc et on compare les distances de migration avec des fragments de tailles connues qui servent de marqueurs de taille.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

Il est très possible de cloner un fragment d'ADN génomique amplifié par PCR dans un plasmide extrait mais non amplifié, mais il est préférable de déterminer la concentration approximative disponible de ces 2 olécules avant de les utiliser.  [...] Personnellement je n'ai jamais eut de probleme, mais je passe par une etape de purification sur colone ce qui me permet probablement de m'en debarasser (de la meme maniere que les fragments d'ADN clonés apres migration sur un gel d'agarose+BET. Ceci dit, il en faut vraiment pas bcp, car meme a tres faible concentration ca inhibe tres fort la digestion.  [...]