• Forum - Méthodes, Protéine, Quantité

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...] Cela peut aussi permettre de passer la protéine d'un tampon à un autre, il suffit d'éliminer une forte quantité de tampon (ne jamais faire arriver la protéine à sec) et d'ajouter à la quantité restante le tampon voulu. Avec cette méthode, la protéine reste sous forme native et soluble, contrairement aux méthodes de précipitations.  [...]

[Biochimie] Inhibiteurs d'enzymes

C'est une question à priori simple mais qui demande une réponse hyper compliquée. Il y a deux méthodes, soit ta protéine a une activité facilement mesurable. Tu peux alors mesurer l'effet d'une collection de molécules sur l'activité (tu peux pour ça t'aider des homologies de structures d'autres protéines ayant des molécules inhibitrices connues).  [...] Les méthodes nécessitent au minimum que ta protéine soit purifiable en quantité suffisante et, encore mieux, qu'elle soit cristallisable (ou ait déjà été cristallisée).  [...]

[Biochimie] Elisa/immunoturbidimétrie

En effet les deux sont basés sur une réaction qui entraînera une coloration ou non en fonction de la présence ou non de la protéine mais du coup je ne comprends pas en quoi ces méthodes sont des méthodes dite de purification SPECIFIQUE.  [...] Le test Elisa et l'immunoturbidimétrie sont des méthodes décrites comme permettant la purification d'une protéine spécifique... Euuuh non, pas du tout. Ce sont des méthodes de dosage. Ces dosages sont spécifiques car requièrent d'avoir un anticorps spécifique de la protéine à doser.  [...]

[Biochimie] méthode etude macromolécules

La spectrophotométrie est une méthode permettant de suivre la purification des protéines en faisant appel aux caractéristiques des acides aminés aromatique visible a 280 nm.  [...] Comme tu le dis il s'agit d'une méthode pour suivre la purification des protéines c.a.d observer la quantité de protéines (par exemple) à un instant T. Cependant, il faut d'abord purifier les protéines par exemple en colonne d'exclusion par la taille (ou toutes autres méthodes) tu récolte au fur et à mesure dans des béchers puis direction cuve de spectro pour avoir une idée de la quantité (il y a ou pas et en quelle proportion).  [...]

[Immunologie] Test ELISA direct

Pour un TP d'immuno, nous devons doser la quantité de protéines virales dans un extrait de vigne. Une gamme de concentration a été réalisée ainsi que les mesures d'absorbance... Nous utilisons deux méthodes, le test ELISA simple sandwich et le test ELISA direct.  [...] Je pense que je fais à peu près le même tp que toi. Perso, j'ai représenté la DO en fonction du log du facteur de dilution puis j'ai choisi la partie linéaire des courbes (partie descendante sur ma courbe). J'ai déterminé les équations de droite, choisi une ou 2 valeurs de DO dans l'intervalle et je suis revenue à mon facteur de dilution.   [...]

Haute résolution

Je voulais savoir quand on dit que la structure d'une protéine a été obtenue à haute résolution ça veut dire quoi On utilise quelles méthodes.  [...] Il existe deux méthodes pour déterminer la structure des protéines, la résonance magnétique nucléaire ou RMN et la diffraction des rayons X par des cristaux de cette protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne

[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne.   [...] Je travaille sur une proteine des pili bactériens en utilisant pour isoler cette protéine (sous-unité pilE du pilus) 2 méthodes. l'extraction à la guanidine (détergent) et la digestion à la papaïne (enzyme protéolytique). Est-ce que quelqu'un saurait quelles autres applications il y aurait pour ces 2 méthodes ou autrement quelle est leur action, au niveau moléculaire.  [...]

[Biochimie] Format pdb

il va d'abord falloir résoudre un problème trivial. Trouvez la structure de cette protéine a partir de sa séquence primaire. je vous suggère deux pistes. les methodes ab initio ou par les méthode par homologie.  [...] Les méthodes de prédiction de structure portent bien leur nom. Ce sont des prédictions, généralement aussi fiables que l'oracle de delphes en plein délire hallucinatoire (j'exagère volontairement). Si une protéine dont la structure a été résolue expérimentalement se trouve aussi avoir une forte identité de séquence (.  [...]

[Biotechnologie] Résultats d'un criblage biologique...

Pour revenir sur les methodes, c'est en général des tests de compétition. on fixe la protéine d'intéret sur une microplaque et on regarde la capacité des molécules à empêcher la liaison entre la proteine et un ligand de la proteine qui est marqué soit par un élément radioactif, soit avec une sonde fluorescente.  [...] Oui, c'est l'intérêt principal de ce type de méthodes, qui permet d'éliminer les différentes étapes d'absorbtion de la protéine cible, saturation de la plaque, lavages.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise au point des conditions PCR

Je dois amplifier un grand nombre de gènes, j'ai désigné des amorces spécifiques et pour un certain nombre, j'ai rencontré des problèmes.   [...] *Pour 10% de mes gènes environ, je n'ai pas d'amplification. J'ai essayé différentes méthodes. augmentation du volume de réaction, diminution de la quantité d'ADN, baisse du Tm de 58 à 56°C. Rien n'a fonctionné, je cherche donc d'autres méthodes qui pourraient améliorer mes conditions PCR.  [...]