• Forum - Méthode, Stock, Glycérol

[Microbiologie] conservation de souches microbiennes

je compte conserver mes souches sous forme de cryotubes à _ 20, pourriez vous m'aidez pour le protocole car ce q j'ai pour le moment ne marche pas (contamination), il s'agit de souche d'actinomycetes avec spore donc en fait je vais conserver des spores, aussi le comptage se fera sur cellule de Mallasèze, aidez moi aussi pour la méthode de comptage sur cellule de mallasèz. merci pour votre aide.  [...] Bonjour, effectivement pour congeler des souches bactérienne la méthode la plus utilisée est le stock glycérol.  [...]

Microbiologie: méthode d'analyse microbiologique Glycerol et Sorbitol liquide

Microbiologie. méthode d'analyse microbiologique Glycerol et Sorbitol liquide.  [...] SVP j'ai besoin d'une méthode d'analyse microbiologie du Glycero l et du Sorbitol liquide non cristablisable (70%) utilisés comme matières premières pour des produits pharmaceutiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage

Mon maitre de stage a d'abord pensé à une possible contamination des cultures mais les manip sur milieux LB avec différents antibiotiques ont permis de rejeter cette hypothèse.   [...] Il eut entendu parler de repiquer une culture liquide ou un glycérol stock sur boîte, est ce que quelqu'un saurait faire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Stock glycérol temporaire à -20°C ?

Voilà, je fais de la bactériologie et j'aimerais savoir si je peux faire des stocks glycérol stocké à -20°C au lieu de -80°C. Ce serait pour un usage très temporaire. Normalement, je ne stocke que les souches finales que je fais mais j'aimerais aussi sauver directement les candidats que j'obtiens après transformation, pour garder une souche stable (ma protéine est toxique chez E.  [...] coli que j'utilise comme outil) durant les vérifications nécessaires (PCR diagno, restriction,...). Le problème est que je n'ai pas bcp de place dans le -80°C et donc je me demandais si je pouvais sauver mes candidats dans mon -20°C.   [...]

[Microbiologie] conservation des phages

En effet je travail sur des bactériophages et j'essaye de les conservés. J'ai déjà fais des stock glycérol pour conserver mes bactéries. Mais c'Est la première fois que je travail avec des phages.  [...] Les lysats de phages se conservent au frigo quelques heures à quelques jours en fonction de leur stabilité. Tu devrais regarder dans les articles sur les phages de la même famille que le tien. Bon courage.   [...]

[Biochimie] dosage des triglycerides

es ce que il existe d'autre méthodes quelque soit dans le sang ou dans le lait ou cellules quantitative ou qualitative.  [...] Je ne connais pas d'autre méthode que le dosage enzymatique indirect (glyçerol) avec ou sans purification (hplc ou ccm).  [...]

[Microbiologie] Congélation banque

A -80°C j'utilise 500 µl d'un mix glycérol/eau 50/50 pour 2/3 (1ml) de culture LB concentrée. Le résultat est satisfaisant.  [...] Mais à -150°C je crains que la cryoprotection par ce mix soit insuffissante pour minimiser la perte de viabilité sur le long terme.   [...]

RT qPCR

Pour contrer cela on rajoute bien souvent du glycerol pour éviter ce phénomène, c'est pour ca que votre enzyme dans sa solution stock est conservée dans du glycerol (qui sert de cryoprotectant) et qu'elle est à -20.  [...] Ce que Flying voulait dire, c'est que si vous avez mis l'enzyme, dans votre mix et que votre tube est retourné à -20, le glycerol est devenu minoritaire dans votre solution et votre enzyme dans l'eau ne va pas apprécier la congélation.  [...]

[Biochimie] Induction de protéines GST

Pour répondre à tes questions, au début, j'étais repartie d'une colonie que j'avais repiqué sur boite ampi. N'ayant pas eu de résulats, je suis repartie de mon glycérol stock mais toujours rien. Je n'ai pas retenté de transformer à nouveau dans des bactéries mais je pense que je vais essayer, voir ce que ça donne.  [...] En général pour ce genre de chose il vaut mieux avoir une boite stock et taper dedans pour faire un starter puis un grosse culture que l'on induit à l'IPTG. Le truc c'est que la boite stock ne doit pas être trop vielle. Dans les protocoles il est souvent écrit que pour l'induction IPTG il n'est plus nécessaire de mettre de l'ampi (normalement votre inoculum est ampi R ).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR de clones

Bonjour, comme la majorité des gens qui posent une question sur ce forum. je suis dans une impasse et j'ai besoin d'aide. Alors il y a encore quelques semaines, je pouvais amplifier par PCR classique l'ADN de lignées cellulaires avec mes contrôles (clones) et du jour au lendemain mes contrôles ne sortent plus.   [...] Alors, en partant de la même hypothèse que toi, j'ai refais une dilution. mais non même résultat. J'ai donc remis en culture mes glycérol stock. même résultat. En effet la dernière étape c'est refaire le clonage dès le début. C'est le programme de cette semaine. Mais toutes idées est bonne à prendre.  [...]