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[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

On introduit un volume de tampon phosphate à notre solution de protéine afin que la protéine soit chargée négativement et qu'elle adhère au support de DEAE-cellulose chargée positivement.  [...] Ce serait bien de décrire comment est mesurée l'activité, ainsi que la méthode de dosage de protéine. Et il faudrait mesurer l'activité et la quantité en protéine à chaque étape, avant le sulfate d'ammonium, après.  [...]

determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

en utilisant les Absorbance spécifique à l'acide urique produite pendant les 10mn de réaction comment calculer l'activité spécifique de cette protéine en nmol d'acide urique/min mg de proteine.  [...] Pour le calculer on part de l'activité enzymatique qui sont les micromoles de produits formés par minutes et par ml de protéines et de la concentration en protéine en solution (mg/ml).  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...] Cela peut aussi permettre de passer la protéine d'un tampon à un autre, il suffit d'éliminer une forte quantité de tampon (ne jamais faire arriver la protéine à sec) et d'ajouter à la quantité restante le tampon voulu. Avec cette méthode, la protéine reste sous forme native et soluble, contrairement aux méthodes de précipitations.  [...]

[biologie moléculaire] Info sur le slot blot

Est-ce que grace à l'electrophorèse du western blot on peut avoir une idée de la taille et de la quantité de protéine recherchée.  [...] cette methode permet de comparer l'expression d'une protéine d'un puit à l'autre d'un point de vue qualitatif mais ne donne aucune info concernant la quantité de protéine présent dans l'extrait.  [...]

[Biochimie] Chromatographie sur colonne

On a fait une gamme étalon de l'absorbance de BSA colorée au réactif de Bradford. mais c'est quoi le BSA quelle est son utilité il est censé représenter une protéine.  [...] Sinon je pense exactement comme toi. Il faut utiliser la droite d'étalonnage pour trouver la quantité de protéine. Il n'y a aucune autre manière (ou peut être trouver l'équation de ta droite et calculer avec ça mais franchement ça sert à rien vu la précision de la méthode ).  [...]

Activité enzymatique du lysozyme purifié

Je suis en plein rapport de T.P. et j'ai pas mal de doute sur la méthode que j'ai employé puisque c'est la première fois qu'on calcule une activité enzymatique.  [...] Mes doutes sont plus sur la méthode, surtout si il ne faut pas non plus multiplier par le facteur de dilution la quantité de protéine, comme pour trouver l'activité enzymatique de Fo non diluée, afin de trouver le reste.  [...]

Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse

J'ai un problème de biochimie à faire et je bloque un peu le but est de comparer 2 méthodes utilisées pour purifier une protéine sérique.  [...] Pour chaque méthode je dois calculer la quantité de protéine voulue obtenue et les pertes survenues au cours de la purif (sachant que je connais la quantité initiale).  [...]

proteinesdans le culot ou le surnageant

en effet j'en ai un organe ( foie) dans le quel je veux doser la quantite de proteines totale pouvez vous me dire si ma methode et juste.  [...] apres je prend le culot et j'ajoute 1 mL de triton 100x Hcl 0.1 M (0.4% v/w) puis je ferai une petite centrifigation a 10 000 g pendant 2 min et je dose la quantite des proteines par la methode BCA.  [...]

[Immunologie] Comparaison impossible entre 2 lots anticorps secondaire polyclonal

Au boulot nous utilisons la méthode WB pour quantifier une protéine (nommé Protéine B).  [...] Pour cela, nous effectuons une courbe standard en 5 points a partir d une préparation purifié de cette protéine pour laquelle ont connait la concentration. Sur le même gel se trouvent les échantillons a doser et un contrôle.  [...]

ELISA et protéine dénaturée

je travaille sur des protéines recombinantes. Mon problème est que je souhaiterai faire un dosage par ELISA de protéines recombinantes sur lequel serait fixé des tensio actifs style SDS. Est ce que quelqu'un sait par expérience si les molécules de tensio actifs peuvent géner voir empécher la fixation des anticorps sur la protéine. Merci.  [...] es ce que quelqu'un connait des documents ou il explique comment distinguer l'epo naturelle et de synthese grace a la méthode elisa.  [...]