• Forum - Marquage, Vert, Rouge

même marquage immunofluorescence dans le vert et le rouge

J'ai réalisé un double marquage immunofluorescent, protéine d'intérêt et protéine mitochondriale et le marquage sort exactement le même, dans un premier temps j'ai pensé que ma protéine se localisait exclusivement dans la mitochondrie. Mais voilà, en marquant la même protéine et une autre protéine non mitochondriale cette fois-ci, le marquage est complètement diffus et les deux marquages se superposent.  [...] . Donc je pense que cette fois-ci j'ai du pioché le mauvais aliquot. lapin anti-souris rouge qui va être reconnu par mon autre secondaire chèvre anti-lapin vert et donc donner le même marquage. Ceci m'amène à une autre question. mon secondaire chèvre anti-lapin vert n'aurait-il pas du reconnaitre mon anticorps primaire quand même ou est-ce que ça peut s'expliquer par l'affinité et la compétition entre les deux anticorps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence

Pourquoi voulez vous faire le couplage vous même On trouve des anticorps commerciaux déjà couplés. Pour le choix du fluorochrome c'est à vous devoir avec les filtres dont vous disposez. Chez nous, par exemple, on utilise souvent Cy3 en première intention.   [...] L'anticorps secondaire pourra être un anticorps de lapin conjugué à la fluorescéine (marquage vert) ou à la rhodamine (marquage rouge ou rose) et dirigé contre les IgG de souris par exemple (si l'anticorps primaire est un anticorps de type IgG produit par la souris et dirigé contre une protéine du cytosquelette comme l'actine).  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluoresence

les gars ont menés une expérience de colocalisation par immunofluorescence entre l'AAV2 et la clathrine en utilisant un fluorochrome fixé avec l'AAV2 (Alexa488-labeled AAV2) qui vire en vert et un anticorps contre la clarhrine (rouge). Bref, je ne comprends pas bien la manière dont ils ont procédés et de quoi je ne suis pas familier avec cette technique. Quelqu'un peut il m'aider.  [...] Et si les cellules sont en train d'endocyter le AAV via les puits de clathrine, ils devraient y avoir une colocalisation du marquage vert (AAV) et rouge (clathrine) au niveau sous membranaire voire membranaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 9

Puisque le marquage semble ne troucher que la cellule d'interet alors qu'il semble assez aspécifique (je penche pour de l'actine en vert et des vésicules en rouge (vesicules permettant le maintient des pseudopodes) c'est que la cellule est seule. Sinon, les cellules eventuellement glandulaires autour seraient aussi marquées.  [...] Donc, je tente un fibrocyte (ou fibroblaste ca ne change pas grand chose) du grand omentum avec marquage de l'actine en vert et des vésicules d'exocytose en rouge.  [...]

[Biologie Cellulaire] Déterminer la colocalisation (IF)

J'ai fais un double marquage immunofluorescent mais en traitant mes images j'ai du mal à trancher quant à la colocalisation. En fait, quand j'attribue les couleurs vert pour fitc et rouge pour cy5, je trouve que ce n'est plutôt pas co-localisé mais lorsque j'inverse les couleurs c'est colocalisé (couleur orange).  [...] Oui c'est de la microscopie confocale. Comme j'utilise des fausses couleurs, selon si j'attribue la couleur verte au fitc et rouge au cy5 ou l'inverse rouge au fitc vert au cy5, je perçois une co-localisation ou pas.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 2

Pour les marquages, Piwi est dans le vrai. A gauche equivalent au rouge de la photo, c'est de l'actine (phalloidine rhodamine) et au centre equivalent au vert, c'est bien la tubuline. En bleu, les noyaux marques au Hoechst. L'organisation de l'actine est typique du type cellulaire en question (meme si sur cette photo n'est pas des plus representatives...).  [...] Bon j'ai pas le droit de mettre la photo mais j'ai récemment vu une publie ou le réseau d'actine ressemblait pas mal à ça. Pour ce qui est des microtubules, l'organisation ici est quand même assez originale, et en ce qui concerne l'actine j'ai cu qu'elle était en vert par rapport au marquage rouge car je voyais clairement une augmentation de signal sur la photo de gauche, qui ne me semblait pas être homogène dans toute la cellule.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère....

Pour le marquage, je dirai actine en vert (phalloïdine), DAPI pour le DNA et pour le rouge, peut-être une protéine des points focaux (avec marquage Ac couplé à la rhodamine) mais pas sûr.  [...] Microtubule en vert ça m'étonnerait car le réseau ressemble vraiment à celui d'actine. En général les microtubules sont bien séparés, ne se croisent pas, leur diamètre est plus important et il n'y en peut être pas autant... Le marquage en vert ressemble vraiment à la cage d'actine.  [...]

[Biologie Cellulaire] GFP bleaching

Je voudrais faire un immunomarquage sur des coupes de cerveau provenant d'une souris exprimant deja une proteine taguee GFP. Le probleme est que je n'ai pas beaucoup de cannaux sur mon microscope et je vaudrais donc bleacher ma GFP pour faire un double marquage utilisant un flurochrome vert (type FITC ou Alexa 488) et un rouge.  [...] Je voudrait cependant voir s'il y a de la mort neuronale (par apoptose) et donc souhaiterais faire un marquage TUNNEL. Nous avons un Kit au labo marque au FITC. C'est pour cela que je voulais bleacher la GFP.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 21

bon... c'est une observation en microscopie confocale par immunofluorescence, en rouge, c'est bien de la tubuline. La légende de la photo ne parle pas de marquage PE mais d'un anticorps dirigé contre la ß-tubuline. Il y a les points verts le long des microtubules.  [...] Bon je réponds vite fait à ta question..Le processus en cours c'est le transport vésiculaire antérograde entre le golgi et la membrane plasmique. Le golgi étant marqué en vert(Cy5 peut -être comme marquage, ou tout simplement GFP )). Pour le marquage en vert, soit ils ont fait un pulse avec l'expression de la molécule fusionnée avec la GFP ou son ciblage par un anticorps, suivi d'une chasse pour que le RE ne soit pas marqué.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence marquage

Connaitriez vous un marquage cellulaire solide pour l'ensemble de la cellule dans le rouge Si non, on peut intervertir rouge pour noyau et bleu pour cytoplasme.  [...] J'utilise déjà du vert pour un troisième marquage d'Ac membranaires qui est très bien actuellement et donc j'aimerais ne pas avoir à le changer.  [...]