• Forum - Lignée, Stable, Facteur

Production de Protéines recombinantes

Je suis capable de détecter ces copies surnuméraires en QPCR, les protéines par western-blot mais aucune trace quand je tente un dosage par Elisa.   [...] Est-ce qu'une personne a déjà crée une lignée stable surexprimant un facteur dans le surnageant.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lignée cellulaire en suspension: killing curve et transfection stable

J'ai un léger problème dernièrement, je voudrais transformer de manière stable la lignée cellulaire Daudi qui sont donc des cellules non adhérentes. J'essaie de faire des killing curves pour la Zeocin et la Blasticidin et j'utilise pour cela des 35 mm dishes avec 3 ml de milieu.  [...] Et j'en viens a ma seconde question, lors d'une transformation stable on doit observer l'apparition de foci puis sélectionner ces derniers. Autant je vois comment faire avec une lignée cellulaire adhérente mais pour une lignée cellulaire en suspension, ça m'échappe complètement vu qu'on ne peut pas piquer les foci.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 6

Ces MDCK sont une lignée stable pour l'actine GFP. Enfin relativement stable car les cellules du haut n'ont pas un niveau d'expression au-dessus du seuil de détection.  [...] Je pensais à une cellule infectée de façon chronique par Ecoli qui est tout simplement en apoptose et qui va etre phagocyté par le macrophage en bleu.   [...]

[Biologie Moléculaire] Expression ectopique

j'ai besoin de votre aide afin de savoir comment réalise-t-on une expression ectopique sur un facteur de transcription dans le cadre d'une différenciation.  [...] On peut tout simplement transfecter un plasmide codant le facteur de transcription. Reste à savoir si l'expression du facteur de transcription doit être stable dans le temps. Si c'est le cas, alors il faut sélectionner les cellules ayant intégré le plasmide à leur génome. transfection stable.  [...]

proteine ou cellule stable ???

Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...] et bien, une lignée immortalisée c'est une lignée qui ne rentre pas en phase Go ou sénescence, elle se multiplie sans arrêt, de façon anarchique, un peu comme une tumeur cancéreuse... c'est pour ça qu'on les utilise dans les labo... c'est facile.  [...]

[Génétique] Lignée cellulaire Humaine

Sinon tu peux créer ta propre lignée immortalisée par transfection stable de hTERT + NéoR mais ça prend plusieurs mois. Par souci d'économies cela peut être discutable.  [...] Ben en fait de maniere assez simple, vpharmaco m'a conseillé de m'orienter vers des lignées immortalisées avec hTERT, car je souhaitai des lignées avec le moins de réarrangement possible. En tapant hTERT sur ATCC, j'ai obtenu une liste de lignées, j'ai ensuite epluché leurs caractéristiques pour en trouver qui ne soit pas plyploides et sans remaniements chromosomiques majeurs.  [...]

Caracteres hereditaires et genes

pour les animaux dit de pure race, il y a un pédigrée qui remonte en général à plusieurs générations antérieures.   [...] En faisant un peu rapide une lignee pure sera stable. C'est à dire que tous les individus de la lignées ayant les même genes quand ils se reproduiront la descendance sera identique.  [...]

OGM, sterilité et reproduction

J'explique. on auto féconde pendant plusieurs générations des lignées ayant une caractéristique particulière (exemple. grosse fleur) et de la meme facon une autre lignée avec une caractéristique différente (exemple. belles couleurs).Jusqu'à ce que cette caractéristique soit bien stable.  [...] Il y a très souvent aussi des confusions avec le fait qu'on utilise dans certaines espèces (ex. tournesol) pour créer des variétés hybrides des lignées dites mâle stérile, c'est à dire ne produisant pas de pollen, pour faciliter les croisements souhaités sans avoir d'autofécondations.  [...]

[Biologie Cellulaire] voie de signalisation intracellulaire

lorsque que l'on veut démontrer l'implication d'une protéine dans une voie de signalisation intracellulaire en utilisant un inhibiteur protéique de cette protéine, comment fait-on pour faire entrer cet inhibiteur dans la cellule sans la léser.   [...] Obtenir des lignée exprimant de manière stable l'inhibiteur ne pose pas de problèmes outre les problèmes classiques de transfection. Mais de toute façon on utiliserai juste une transfection transitoire pour ce type de manip donc les cellules perdraient vite l'expression de l'inhibiteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Sélection de lignées stables

Mon labo a acheté une lignée stable Cas9 MDA-MB-231 (cancer du sein). Elle porte un gène de résistance à l'hygromycine. Dans ma data-sheet il est écrit que pour la sous-culture, il faut remplacer le milieu de sélection par du milieu sans antibiotiques pendant 6h.  [...] Ma question est la suivante. pourquoi devoir remplacer le milieu 6h avant de passer les cellules Est-ce que l'hygromycine a un effet sur la trypsine Ou alors est-ce que je ne dois faire ça que quand je veux ensemencer mes cellules pour une manip, et les passer normalement avec le milieu de sélection le reste du temps.   [...]