• Forum - Lendemain, Procédé, Cellules

[Biologie Moléculaire] Impossible de récuperer ma protéine GST-X

Pour 500 ml de culture induite, je reprends les bactéries dans 10 ml de cette solution, j'ajoute une demie pastille de PIC (Roche) et je congèle à -20°C. L'idée est que la congélation soit suffisamment lente pour permettre la formation de critaux de glace qui cassent les cellules.  [...] Le lendemain je procède à la lyse proprement dite en décongelant les cellules à 37°C (je laisse une petit glaçon) et je recongèle immédiatement dans l'azote liquide. Je répète le cycle trois fois.  [...]

Blastèse

De la j'ai procédé a la coloration de gram pour la forme. L'observation au microscope m'a révélé qu'il s'agissait bien d'une levure. J'ai réalisé une blastèse mais ne disposant plus d'assez de temps ce jour la, ce n'est que le lendemain ( 24 h après) que j'ai pu procédé à la lecture.  [...] Salut, merci de ta réponse. La galerie API est le sujet d'un autre TP. Ici le but était juste (pour moi) de procéder a un test de filamentation et de voir si ce dernier est positif ou non. Mon problème était de savoir si il y avait une possibilité d'une formation de filament lorsque l'on attendait trop longtemps pour lire le test (des résultats faussé quoi).  [...]

Décongélation et ensemencement 3T3

- à votre avis, vaut-il mieux que je change le milieu dès maintenant pour me débarrasser des cellules mortes ou j'attends demain pour ne pas les traumatiser dans leur croissance le lendemain de leur décongélation.  [...] normalement, le lendemain de la décongélation, les cellules encore en vie sont accrochées. Il faut d'ailleurs mieux culotter les cellules et les reprendre dans du milieu de culture avant l'ensemencement pour se débarrasser du DMSO (toxique). Après ensemencement, il faut faire une dizaine de 8 avec la boite pour bien répartir les cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection plasmide B-gal sur 3T3

PS Je précise que j'ai déjà essayé de changer des paramètres, tel que changement de pipette en cas de mauvais pipetage. On m'a dit que mes cellules forment des amas au centre des puits, et que c'est ca qui gêne. Comment faire pour s'en débarrasser J'ai beau remuer, rien n'y fait.  [...] Pour la densité de cellules lors de l'ensemencement, il faut faire en sorte que tes cellules soient à environ 80% de confluence au moment où tu transfectes. Je ne sais pas comment poussent les fibroblastes, mais pour comparaison, j'ensemence 70 000 cellules HeLa ou HEK par puits dans 1mL de milieu et le lendemain c'est bon.  [...]

De l'atome à la cellule

Pour reprendre sur ce que je disais, il faut accepter qu'un système dynamique comme un organisme vivant soit tellement proche de basculer dans le foutoir qu'on observe des régions quasi-cohérentes qui peuvent donner une impression d'ordre. Il y a en fait tellement d'évènements tous-azimuts dans une cellules qu'une partie coïncident suffisamment pour qu'apparaissent des procédures chimiques - qu'on modélise façon des séquences linéaires pour comprendre shématiquement certains enchaînements (voies métaboliques, échanges, stimulations, activations, inhibitions, etc).  [...] Bien sur tout les soirs quand tu t'endors les cellules de ton corps discutent entre elles et elle choisissent ce qu'elles font faire le lendemain matin.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème culture cellulaire HEK293 en plaque 96 puits

Le milieu des puits est alors changé et les cellules sont ensuite incubées 24h avec un milieu contenant des antibiotiques (Pen-strep) ainsi qu'une molécule cytotoxique. Le souci c'est que le lendemain, je retrouve dans mes puits contrôles des cellules disposées en auréole et complètement agglomérées en périphérie (rien ou presque au centre).  [...] On dirait que mes cellules se sont décrochées lors du changement de milieu pour s'agglomérer sur les bords... J'avoue que j'ai du mal à comprendre surtout que j'ai été assez délicat pour éviter de décrocher les cellules (tips au fond du puits, coincé sur le bord, et aspiration du milieu doucement à la pipette puis dépôt du nouveau milieu en plaçant le tip sur la face interne du puits).  [...]

[Divers] Tournesol

Oui, bien sûr. Il faut que les cellules qui soient à l'ombre assurent quand même leur rôle de soutien, sinon le système fonctionne pas. Et il faut que le lendemain tout puisse recommencer. Je pense que les cellules récupèrent en continu, mais que temps qu'elles sont exposées, elles perdent plus d'eau qu'elles n'en récupèrent.  [...] le soleil émet des ondes électromagnétique dans tout l'espace,par conséquent toute la surface reçoit + ou - le même rayonnement. non donc pourquoi l'eau,qui se trouve juste dans quelques cellules se vaporisent.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lipofectamine 2000 et antibiotiques ?

- Eviter les antibiotiques. Certains enlèvent les antibiotiques à partir du moment où ils ensemencent les cellules qui seront transfectées le lendemain ou le surlendemain. Personnellement, je ne les enlève que dans le mélange de transfection et ça a toujours bien marché.  [...] Petite remarque, je n'ai pas mentionné que je procède à une transfection forward, c'est à dire que je place d'abord le siRNA+Lipofectamine en plaque 6 puits et que j'y dépose mes cellules 20 minutes après. Dans ce cas, mes cellules ont-elles eu le temps d'adhérer à la surface Changer le milieu ne risquerait pas de les décoller.  [...]

[Physiologie] Reveil à heure fixe

Alors. Nous avons un rythme circadien naturel qui nous réveille le jour et nous fait dormir la nuit. L'hypothalamus fait sécréter par l'hypophyse une hormone, la mélatonine, responsable du sommeil. Mais pour savoir s'il faut sécréter cette hormone (il fait jour ou il fait nuit dehors ), l'hypothalamus s'aident des cellules de la rétine.  [...] Ces cellules possèdent des gènes. TIM et PER. Gènes qui vont produire des protéines en fonction du soleil. la production commence à midi et se poursuit jusqu'au lendemain matin. A ce moment là, il y tellement de protéines, que la production s'arrête pour reprendre plus tard.  [...]

dosage des protéines

a partir des colonies sur la boite de petri tu en prends une que tu mets dans un milieu de culture liquide (5ml) tu mets le tout a agiter la nuit a 37°C.   [...] le lendemain matin, tu centrifuges tes cellules, tu recuperes le culot de bacterie que tu lyses (il y a plusieurs methode de lyse, avec bille de verres, au chloroforme etc...) ensuite tu preleve quelques microlitres de ton extrait tu ajoutes a l'ONPG et un tampon de reaction et tu incubes le tout a 30°C.  [...]