• Forum - Intérêt, Tampon, Extraction

Na-bisulfite (NAHSO3) , rôle ???

Je ne l'ai jamais utilise dans le cas d'extraction d'ADN, mais dans le cas de purification/extraction de proteines. Il agirait comme anti-oxydant.  [...] J'ignore le rôle du bisulfite de sodium dans le cadre d'un tampon d'extraction. Je voulais juste signaler qu'il pouvait aussi être utilisé pour une mutagenèse. d'où l'intérêt de remplacer C par U pour introduire des mutations ponctulelles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage protéine

Je travaille sur des BL21 GFP et j'extraie les protéines totales par une simple lyse des bactéries dans deux situations. non induites et induites à l'IPTG. Avant de faire migrer sur polyacrylamide, j'aimerais doser mes protéines pour déposer la même quantité dans tous les puits.   [...] non, le sds et le triton (ainsi que la plupart des produits qu'on peut trouver dans un tampon d'extraction) n'interferent pas avec le bradford.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

j'ai une question à vous poser, lors de la préparation de la gamme étalon SBA est ce qu'on utilise pour la dilution l'eau distillée ou le tampon avec lequel on a fait l'extraction des protéines.  [...] je ne parle pas d'ici de la dilution de l'échantillon,mais je parle de la dissolution de SBA.Est-elle dans de l'eau distillée ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...] J'ai testé beaucoup de paramètres pendant 2 mois (ADNg, tampon d'extraction, tampon de PCR, primers, machine PCR, tampon de migration...) et je ne trouve pas l'origine du problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR temps réel

De base, on va plutot envoyer à séquencer un transcrit PCR classique (du tube pcr ou apres visulatisation sur gel et extraction de la bande) cependant rien n'empêche de prendre le produit qPCR, il suffit de le purifier en enlevant le tampon et la polymérase (bien que je ne sois pas sur que ca interfère vraiment, mais dans le doute).  [...] une purification à l'acétate de sodium/ethanol devrait faire l'affaire ensuite tu resuspends dans le volume approprié en eau distillé ou en tampon TE au choix.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

Si ta production n'est pas très grande, attention toutefois à la quantité de billes nécessaire, car plus il y a de billes, plus tu augmentes la possibilité d'intéractions aspécifiques avec les billes. Ta protéine est elle soluble Car il se peut aussi qu'elle soit produite en grande quantité, mais non solubilisée dans le tampon d'extraction.  [...] La quantité nécessaire dépend de plein de paramètres, dont le poids moléculaire de la protéine d'intérêt (plus son PM est petit, moins il y a en besoin, car plus il y a de mole/µg), la force d'intéraction avec le partenaire, du type de détection (western blot, autoradiographie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.  [...] J'ai cherché sur ce forum, et Yoyo disait qu'il avait un protocole d'extraction ( http.//forums.futura-sciences.com/se...archid=4618296 ). Si tu lis ce message Yoyo, et que ton protocole parle d'un tampon de lyse, pourrais-tu me l'envoyer par MP Je t'en serai très reconnaissant.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] Pour bien faire les choses, tu devrais réaliser ta gamme BSA étalon dans le tampon d'extraction, comme ça plus de problème avec la BSA du tampon.  [...]

Western Blot

C'est un peu désespérée que je viens vers vous aujourd'hui. Nous avons effectué un Western Blot en TP la semaine passée, les protocoles nous ont été distribués le matin même, je n'en avais jamais fais auparavant, c'est une technique qui prend un certains temps et donc tout a été fait à l'arrache, nous n'avons pratiquement pas eu d'explication.   [...] - quelle est la différence entre un tampon d'extraction et un tampon de chargement.  [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

acides, protéases,... Enfin, le tampon permet de rester dans des conditions isotoniques qui contribuent au maintien de la forme native de ta protéine.  [...] Cependant, si ton enzyme est robuste, il n'est pas étonnant qu'une extraction à l'eau t'es permis de mesurer tout de même une activité.  [...]