• Forum - Intégration, ADN, Sites, Restriction

Technique "REMI"

Je ne comprends pas la technique REMI. Restriction Enzyme Mediated Integration, quelqu'un pourrait t'il me l'expliquer.  [...] On mélange de l'ADN plasmidique linéarisé avec une enzyme de restriction, celle-ci est capable de générer des extrémités cohésives compatibles dans le génome. Par la suite, cette enzyme stimule l'intégration de cet ADN dans les sites de restriction apparentés dans les chromsomes, souvent en une seule copie qui provoque que très peu de dommages dans le génome.  [...]

Y a-t-il une différence entre un spécimen ogm et un non ogm ?

Ensuite, comme le dit loupsio, on peut imaginer qu'il soit otujors possible de repérer un transgène grâce aux sites de restriction qui le flanquent. Est-ce que ce sera toujours le cas, indépendamment de la méthode d'intégration Genre une intégration aléatoire Médiée par transposons.  [...] ps. dans le pire des cas, on peut toujours, une fois le transgène intégré, induire des InDels dans nos sites des restriction histoire d'effacer les traces (non). Donc j'ajoute cette condition à ma question. une seule manipulation doit être réalisée, donc seulement l'intégration du transgène (pas de manipulations ultérieures pour effacer les traces).  [...]

Intégration dans un plasmide

L'intégration de séquence d'intéret ( un ou plusieurs gènes ) se fait par technique d'ADN recombinant. En gros, tu vas utiliser des endonucléases ( ou enzymes de restriction) qui font créer des extrémitées cohésives ( pouvant être ligasé par une ADN ligase ) sur ta séquence d'intérêt et sur ton vecteur plasmidique.  [...] C'est pour cette raison qu'on utilise un vecteur d'ADN circulaire pour introduire un gène dans une bactérie. Ce vecteur est souvent un plasmide modifié (avec de nombreux sites d'intégration possibles, un promoteur fort avant ces sites, des gènes de sélection pour pouvoir distinguer les bactéries qui ont intégré le plasmide...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide génie génétique

Le polylinker est une zone riche en sites uniques de restriction, ce qui y facilite l'introduction d'un fragment ADN par ligation.  [...] Le polylinker est une région contenant de nombreux sites de restriction qui vont permettre l'intégration de l'insert dans le plasmide.  [...]

Intégration de VIH-1 dans la chromatine: la chute d'un dogme.

En plus de la restauration de l'intégration avec SWI/SNF après mapping des sites d'intégrations sur le plasmide, on s'est aperçu que cette fois ci la majorité des sites d'intégrations se trouve dans la zone positionnant les nucléosomes suggèrant un couplage fonctionnel entre l'intégrase et SWI/SNF via l'interaction avec INI1.  [...] On appuie nos résultats in vitro par une analyse in silico de plus de 40 000 sites naturels d'intégration. Cette analyse est un algorithme de prédiction de positionnement de nucléosome en fonction de la séquence d'ADN, et on trouve que la moyenne des sites se trouve dans une région faiblement dense en nucléosome.  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

je ne comprends pas pourquoi le fait d'utiliser deux enzymes de restriction lorsque l'on veut insérer un ADNc dans un plasmide permet de contrôler le sens d'intégration de cet ADNc.  [...] Même si tu peux aussi couper ton plasmide avec une ou 2 autres enzymes qui génèrent des extremités cohésives compatibles avec celles de ton insert. C'est-à-dire que tu peux avoir un site de restriction reconnu par une enzyme différente mais une fois la coupure faite, l'extremité genérée est compatible avec celle de ton enzyme.  [...]

[Génétique] Duplication VS Duplication

* Par échange ectopique. lors d'une cassure double brin, il peut y avoir recombinaison avec un site non homologue, puis élongation de la molécule d'ADN suivant la matrice d'ADN recombinante, recopiant ainsi une portion du génome après la cassure. La réparation de la cassure a ensuite pour conséquence l'intégration de cette région dupliquée au génome.  [...] Je ne pense pas en cas d'erreur de réplication si celle ci n'est pas réparée on aboutira plus tôt a la perte ou au gain de fonction d'un gène mais pas a sa duplication ^^.   [...]

[Immunologie] A propos du VIH

C'est pourquoi je me demandais si c'est l'intégration du génome viral dans l'ADN des lymphocytes T4 qui provoquait des modifications génétiques de la cellule, provoquant ainsi leur dérèglement et leur inactivation, voire leur suppression.  [...] ...je me demandais si c'est l'intégration du génome viral dans l'ADN des lymphocytes T4 qui provoquait des modifications génétiques de la cellule, provoquant ainsi leur dérèglement et leur inactivation, voire leur suppression.  [...]

VIH et LT4

Les informations génétiques du VIH sont sous forme d'ARN. Pour assurer l'intégration de ce matériel génétique à celui de la cellule il doit y avoir une étape permétant la traduction de l'ARN viral en ADN viral.(Le cycle de réplication du VIH dans sa cellule. etape de transcription).  [...] Durant la Transcription.Les informations génétiques du VIH sont sous forme d'ARN. Pour assurer l'intégration de ce matériel génétique à celui de la cellule il doit y avoir une étape permétant la traduction de l'ARN viral en ADN, c'est la transcription. La transcriptase inverse est une enzyme, contenue à l'origine dans la capside virale, qui permet à l'aide des nucléosides contenus dans la cellule de construire un brin d'ADN viral à partir de l'ARN.  [...]

[Génétique] protocole experimental?

3) cultiver en milieu.mutagene.de.sorte.que les. Alleles ou se situent les genes les plus importants soient alteres durablement (cassage de plusieurs codons par l utilisation peut etre d enzymes de restriction appropriees).autremment dit on rendraient les alleles sur ces eucariotes diploides recessifs.  [...] Comme la regeneration et la mmutation genetique dues aux accidents de replications de l adn lors des mitoses mettrait en termes de probabilite un temps.enorme pour permettre l integration du point de vue de l evolution de ces nouveaux quanta genetiques a notre adn sans provoquer d effets letaux.  [...]