• Forum - Hybrides, ADN, ARN

ADN-Cytosol

Chez les eucaryotes, jamais l'ADN ne quitte le noyau... trop de risque de mutation / dégradation. C'est pour cela le noyau, minimiser le contact de l'ADN avec l'extérieure.  [...] D'ailleurs, si je me souviens bien, il y a des protéines cellulaire qui patrouille dans le cytosol pour détecter tout ADN (et le détruire) ainsi que les hybrides ADN/ARN.  [...]

[Biochimie] Nucléase S1

il est question en effet de nucléase S1, je me suis renseigné il est dit que cette enzyme dégrade les acides nucléiques simples brin, mais qu'elle ne peut pas détruire les hybrides ADN-ARN.  [...] Selon moi, le S1 mapping commencerait par le marquage d'une sonde d'ADN, puis on dénature pour n'avoir qu'un seul brin d'ADN, et ensuite on va l'hybrider avec une séquence d'ARNm en 5' de celle-ci, puis on utilise la nucléase S1, afin de couper les parties qui ne se sont pas hybridées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn...

- Au sujet de l' hydridation d'ADN de différentes espèces. l'ADN est naturellement sous forme double brin et peur être dénaturé en simples brins par la chaleur. Si deux brins complémentaires dénaturés sont mis à refroidir ensemble dans des conditions de vitesse et de salinité définies, ils vont se réapparier.  [...] Il faut que les brins soient quand même très similaires pour que l'hybridation se fasse, sinon la molécule ne sera pas assez stable pour rester stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Différence RNase A / RNase H

Est-ce que vous pouvez m'expliquer la différence entre la RNase A et la RNase H Si j'ai un peu compris la première est plus thermorésistante et les deux sont utilisées pour détruire l'ARN dans les hybrides ARN-ADN.  [...] La RNAse A est une enzyme qui va te dégrader tout les ARN présent dans ta solution. La RNAse H est une enzyme qui va spécifiquement dégrader l'ARN lorsque ce dernier est en duplex avec un brin d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNdb - ARNm

Ni, et là je me trompe surement, etant donné que l'ARNm correspond qu'à une petite séquence de l'ADN, pourquoi ne pourrait t-il pas y avoir hybridation d'ARNm-ADN brin matrice, puis ADNbrin matrice-ADNbrin codant en les bases qui ne sont pas déjà liées à l'ARN.  [...] Oui, je vois ce que tu veux dire. Une situation où tous les introns sont hybridés au brin complémentaire d'ADN tandis que les exons sont hybridés à l'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

La théorie de l'hybridation de l'ARNr et du cDNA n'est pas si bête mais je ne suis pas sur que se soit vraiment cette théorie. D'autant que les transcriptases reverse ont effectivement une activité RNaseH mais celle que j'utilise à une mutation qui limite cette activité.  [...] 1/ concernant l'échelle. effectivement j'ai une échelle différente sur mes graphes. pour l'ARN je vais jusqu'à 30 fu (unité de fluorescence) pour mes cDNA à 3 mais si je vois mon ARNr à 30 Fu je devrais le voir d'avantage à 3 Fu sauf si il a été dégradé, étant donné que pour une efficacité de 100% de ma RT, 1 brin d'ARNm est transformé en ADNc, je devrais avoir dans tous les cas, toujours moins d'ADNc que d'ARNr (80% environ des ARN).  [...]

Technique de RACE-PCR?

Pour la RACE en 3', tu va utiliser la queue polyA en 3' d'un ARNm pour hybrider un oligo dT qui va te servir a amorcer la RT-PCR, sur l'ADNc correspondant tu fais ensuite une PCR avec un oligo gene specifique (sens forward) et ton oligo dT. Ensuite, tu clones ton produit PCR, tu le fais sequencer et tu as la position exacte du stop de terminaison.  [...] La queue polyA initialement en 3' de ton ARN est passée en 5' de ton ADNc. Si tu hybrides sur cet ADNc un oligo gene specifique, lors de la premiere etape de PCR, cet aoligos va se contenter de fabriquer le 2eme brin d'ADN (le brin complementaire de ton ADNc).  [...]

Marche sur le chromosome

disons, lors de cette technique on utilise une sonde et cette sonde peut tomber sur l'ADN répété et comme on a des clones qui sont hybridés et hybridés entre eux dans d'autres endroits.Cela va probablement couper la marche.  [...] La premiere étape consiste a fabriquer une banque de fragment d'ADN genomique sur lequel va etre fixé un adaptateur. Ensuite il suffit de faire une PCR en utilisant une amorce spécifique du fragment d'ADN que tu connai et une amorce spécifique de l'adapatateur.  [...]

Northern Blot

Sachant qu'au départ j'ai une sonde ADN complémentaire à l'ARNm étudié.  [...] Pour le northern-blot, tu fais directement migrer tes ARN purifiés ou non (soit des ARNtotaux, soit des ARN polyA+) sur gel d'agarose. Tu transfert sur une membrane et tu hybrides avec ta sonde.  [...]

[Biochimie] La Replication de l'ADN durant l'Interphase

Tandis que le modèle semi-conservatif contient quant à lui des ADN hybride et léger. ( Pourquoi Je n'arrive pas à l'expliquer ).  [...] Confus. Ce résultat signifie que les deux brins d'ADN hybride se sont séparés. Le brin lourd s'est adjoint un nouveau brin constitué d'azote léger (donc ADN hybride) et le brin léger s'est adjoint un nouveau brin d'ADN léger. La moitié des molécules sont donc hybrides et l'autre moitié est représentée par de l'ADN léger.  [...]