• Forum - Hybridation, Localisation, Cellule

Expression de gène

Et étant donné qu'on a un amplification proportionnelle des ARNm l'intensité de la couleur des spots suite à l'hybridation nous renseignera sur la forte ou faible expression de ceux-ci dans la cellule en comparant avec des témoins.  [...] L'hybridation in situ apporte en plus la localisation de l'expression des gènes sur une coupe histologique (tissu cellulaire). Non seulement on sait si le gène est exprimé et à quelle intensité il l'est mais on sait aussi quelles sont les cellules du tissu qui les expriment (toute les cellules d'un organisme ont le même génome mais pas le même transcriptome).  [...]

[Biotechnologie] Anticorps monoclonaux

Bonjour, je suis en 3eme année de pharmacie, je révise mon cours de biotechnologies sur la production d'anticorps monoclonaux, et je me pose une question. j'ai bien pigé la méthode d'hybridation de Kohler et Milstein, mais je comprends pas pourquoi l'hybridation avec une cellule de myélome est nécessaire.  [...] Je pense que cela est nécessaire pour que les lymphocytes (plutôt hybridomes dans ce cas là) soit transformés en plus d'être immortels. Ainsi ils ont des capacités de prolifération exploitable pour la production d'anticorps en grande quantité. En effet les lymphocytes sont bloqués au niveau prolifératif, ils ne peuvent que se différencier en plasmocytes.   [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Pour étudier la localisation de l'expression d'un gène (à l'échelle cellulaire, pas subcellulaire), quel est l'intérêt de l'hybridation in situ par rapport à l'utilisation d'un rapporteur sous contrôle du promoteur de ce gène (ou l'intérêt de cette dernière technique par rapport à la 1ere).  [...] Ca depend comment est realisee la fusion, il est possible de faire une fusion traductionnelle du gene rapporteur avec la proteine d'interet afin de detecter la localisation de celle ci. Dans ce cas, il est recommande de transformer une telle construction dans un mutant pour le gene d'interet afin de voir si la proteine de fuision complemente le phenotype (un tres bon controle).  [...]

[Biochimie] cDNA - regulation des genes

''Chacun de ces cercles est un CDNA qui est fixée au fond du puits, on réalise un hybridation dont la couleur va être proportionnelle a la quantité des ARNm ds la cellule qui ns intéresse.  [...] Un ADNc (= ADN complémentaire) correspond à la copie ADN d'un ARNm mature (sans les introns). Ces ARNm sont les produits témoignant de la régulation et de l'expression du génome d'une cellule.  [...]

[Biologie Cellulaire] Télomères et vieillissement

Petite question à moitié HS. pour la production d'anticorps monoclonaux, on crée un hybridome en associant un lymphocyte B à une cellule cancéreuse. Quel est le but de cette hybridation Faire en sorte que le lymphocyte se reproduise indéfiniment.  [...] Oui, c'est utile pour obtenir des anticorps monoclonaux en grande quantité. L'hybridation permet d'avoir une population durable et génétiquement stable de cellules productrices d'anticorps strictement identiques.  [...]

selection de cellules par la technique de l'hybridation in situ

Je ne comprends pas tres bien la technique d'hybridation in situ, pour observer si un mRNA particulier est exprimé au sein d'un tissu ou d'une cellule, il faut bien faire éclater les cellules. Et parfois on nous dit que ça nous permet de voir quelles cellules ont intégré un transgène par exemple et de les sélectionner.  [...] Ensuite tu détectes tes sondes dans ta cellules pour savoir si ton mRNA cible est présent et donc si le gène correspondant est exprimé ou pas.  [...]

Expériences en génétique…

Pour ce qui est du P32, on peux l'utiliser in vivo pour visualiser (par exemple) des protéines ou des acides nucléiques dans la cellule. Ce dont tu parles c'est de l'hybridation in situ et ça ne s'utilise pas avec un gel mais sur une cellule vivante.  [...] Maintenant quand l'on connait un gène et que on veut l'identifier dans le genome on peut effectivement proceder par hybridation type southern blot. Dans ce cas l'hybridation radioactive est effectivement la methode courante.  [...]

[Microbiologie] hybridation moléculaire

je veux savoir également comment je pourrais discuté les résultats de cette hybridation moléculaire (ADN-ADN)afin de montrer la localisation chromosomique de gene de resistance bla lut.(la figure ci-joint).la premiere photo c'est un profil électrophorèse en champ pulsé (PFGE) de l'ADN de la souche Pseudomonas luteola digeré avec l'enzyme I-CeuI.  [...] la photo B,c'est l'hybridation des fragments avec une sonde spécifique d'un gène de résistance,et la photo C c'est l'hybridation avec une sonde 16s.les rèsultats de cette analyse a montrè que la sonde bla lut,specifique de gene a été hybridé avec un fragment de taille entre 700kb-800kb et il a hybridé aussi avec la sonde 16s,et pourcela les resultats suggere que le gene est chromosomique.  [...]

[Microbiologie] Hybridation Southern Blot

je veux savoir le protocole de la technique hybridation..j'ai réalisé la technique Southern blot avec des échantillons des bactéries résistante à la betalactamine,je voulais detecter la localisation du gene de résistance en question, donc je dois procédé a faire une hybridation,je veux savoir de quoi il s'agit exactement,le principe,un protocole classique pour comprendre ce que je devrais savoir(c'est pour mon mèmoire).  [...] a) S'il s'agit d'une variation génétique/ allélique d'un gène séquencé, en designant la sonde selon le gène sauvage, vous aurez tout de même une hybridation hétéroduplex (incomplète/imparfaite), mais pour une détection par SB ça devrait suffir.  [...]

OGM et pollution génétique de l'eau

Ce qui distingue les technologies de génie génétique et les récents développements (à échelle humaine) de l'agriculture en matière d'hybridation de manière générale, c'est qu'avec les dernières avancées techniques dites biotechnologiques, l'homme fait intrusion au sein même de la cellule vivante et fait usage d'artifices (incorporation de gènes animaux dans les végétaux, gènes de marquage résistants aux antibiotiques, utilisation du promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur) qui ne pourraient jamais se produire à l'état naturel ou par croisement traditionnel.  [...] Un processus de dégradation ne fait aucune différence. Les composantes cellulaires de la plante se désorganisent dans un champ informationnel régi par des lois biophysiques. Pour une plante ogm, les inserts qui sont déjà destructurés informationnellement et intégrés de manière plus ou moins réussie à la cellule hôte rejoignent les sols, comme pour une plante normale.  [...]