• Forum - Gamme, Quantité, Cellules

Housekeeping gene (gene de ménage)

À votre place j'etalonnerai avec une gamme obtenue avec des quantités décroissantes d'ADN extrait d'une quantité de cellules connue (pour avoir une quantification en nombre de cellules).  [...] Mais dans votre cas, vous ne mesurez pas un transcrit, mais une quantité de cellules. Mesurer un transcrit (que ce soit d'un housekeeping gene ou de n'importe quoi d'autre) introduit un biais, car (par expérience) même un gène considéré comme référence n'est pas utilisable quand on compare des tissus différents.  [...]

[Biologie Cellulaire] Test cytotoxicité MTS

Je suis sceptique quant à l'idée que vous obtiendrez une réponse précise. Je pense que la seule solution est de faire une gamme pour tester la quantité de cellules optimale.  [...] Clairement il vous faut faire une gamme de dilution pour voir ce qui vous va le mieux. Pour vous répondre il faudrait connaitre les lignées, mais surtout voir comment vous travaillez. En culture cellulaires certaines personnes ont la main verte et tout pousse du feu de dieu, d'autres on plus de mal et rien ne pousse.  [...]

[Biologie Moléculaire] question sur la QPCR

Logiquement tu dois avoir une gamme d'étalonnage, c'est à dire des puits où ont été mis des quantités connue d'ADN d'intérêt. Grâce à ces puits, on peut tracer une droite reliant les Ct et les quantités d'ADN. Avec la taille du génome et le nombre d'Avogadro, tu peux calculer combien de cellules il a fallu lyser pour obtenir cette quantité d'ADN (ce qu'on appelle équivalent génome).  [...] La droite d'étalonnage doit être faite pour qu'à un Ct corresponde X. après que X soit un éq génome, une quantité d'ADN ou une unité arbitraire, je dirais que c'est à toi de décider laquelle te sera la plus utile par la suite.  [...]

[Biochimie] Calcul de quantité de proteine

Voilà j'ai un doute concernant un calcul. En faite je fais une gamme de proteine qui me permet de calculer les proteines totales presentes dans mes essais. Cette gamme est en mg/mL. Ensuite je fais une autre manip qui me permet de connaitre la quantité d'une proteine specifique.  [...] La gamme de cette proteine specifique est en ng/mL. Or au final je veux une quantité en ng de cette proteine par mg de proteine totale. Dc je divise ma quantité en ng de proteine specifique par ma quantité en mg de prot totale. Est ce que le raisonnement est bon.  [...]

Faire produire de la chaleur à des cellules

Sauf à faire remplir la cellule de luciférine à l'aide un entonnoir, je crois malheureusement que la quantité d'énergie libérée sera vraiment infinitésimale. Et je pense que ce sera d'autant plus vrai si tu vas dans la gamme du proche-IR. Les sondes proche-IR (650-900 nm) sont très appréciées en imagerie médicale justement en raison de leur faible atténuation par les tissus bio, qui permet à la lumière proche-IR de voyager loin (une figure bien connue.  [...] Si on ne peut pas avoir le contexte cellulaire alors autant apporter directement les acides gras libres dans les cellules non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

A partir du moment ou la spécificité de ton amplification d'ADN champignon est avéré, il me semble que tu peux en conclure que ton échantillon est positif pour ce champignon. même en faible quantité, ce dernier est présent et se multiplira de toute façon.  [...] Le nombre de copie permet de revenir à une sorte d'unité internationale, car à partir des conditions expérimentales qui peuvent varier d'un manipulateur à l'autre (quantité d'ARN de départ, conditions de qPCR, mix utilisés etc...) les Ct peuvent varier. Après une normalisation par un gène de ménage défini et/ou l'utilisation d'une gamme étalon, on s'affranchit de ce genre de problème.  [...]

[Biochimie] Quantifier un western blot

Il existe des appareils spécialisé (genre chemigenius), qui permette d'acquérir des images jusqu'à 65 000 niveaux de gris, couplé au logiciel genetool pour faire une analyse automatique (identification des pistes et des bandes, determination de la taille/poids moléculaire par rapport à une marqueur, détermination de la quantité par rapport à une gamme standard).  [...] Bien sur cela est hyper exigeant. Donc on peut mettre au point ses conditions quantitatives en testant une gamme avec une certaines quantité d'anticorps, un certains temps d'expo, etc... L'expérimentateur devant alors utiliser ces mêmes conditions pour les manip avec les échantillons test.  [...]

[Biologie Moléculaire] transfection lipofectamine LTX and PLUS reagent invitrogene

Pour la transfection en elle-même, les lipides cationiques restent relativement toxiques pour les cellules, et les fournisseurs de réactifs de transfection sont bien souvent vagues, là où certains n'en parlent même pas, sur la notion d'optimisation de la quantité de Lipofectamine et d'ADN à utiliser lors des transfections.  [...] je transfecte en Opti-MEM comme indiqué sur le protocole du fournisseur et dans les quantité prescrites par le fournisseur. j'ai déja essayé une gamme de lipo mais ayant oublié de changer le milieu au bout de 4h j'ai pensé que la mort cellulaire que j'obtenais venait de là.  [...]

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

La manip suivante consiste à mesurer l'absorbance de nos fractions contenant le cytochrome c (rouge) et celles contenant le dichromate de potassium (jaune). Grâce à la gamme étalon du cytochrome c, on a pu obtenir la quantité de cytochrome c de nos fractions, en mg.  [...] On a ensuite dû prélever 20micro litres des fractions 1 à 11 (la dernière contenant les dernières molécules de cytochrome c) et d'y rajouter 1mL de bleu de Coomassie permettant de mettre en évidence la présence des protéines. Avec la gamme étalon du BSA, on a pu obtenir la quantité de protéine pour ces fractions, en micro g.  [...]

[Biologie Moléculaire] Encore de la Q-PCR : quantification absolue maintenant

Ma question aujourd'hui est la suivante. je souhaiterais faire une quantification absolue de mon transcrits d'intérêt pour cela j'ai compris qu'on utilisait la gamme de dilution et les Ct mais j'arrive pas à voir comment on peut revenir à une quantification de transcrits puisque pour la gamme on ne connait que la quantité total d'ARN et pas celle du transcrit.  [...] Mais je vois pas comment je peux connaitre dans ma gamme la quantité de mon transcript, je peux juste connaitre la quantité d'ARN tot.  [...]