• Forum - Extrémités, Sites, Restriction

[Biologie Moléculaire] Clonage - Page 2

Tout simplement car il n'y a aucuns sites de restrictions (qui puissent convenir) aux alentours...les deux sites de restrictions que j'ai besoin de placer aux extremités servent a isoler les cassettes que j'ai besoin de recuperer si je m'ecarte je vais amplifier au passage donc des parties que je n'ai pas besoin et qu'il me sera dur d'enlever apres.  [...] Dommage que tu ne puisses pas nous mettre ta séquence, peut-être que tes séquences riches en GC forment un hairpin qui fait sauter la polymérase lors de la PCR. Pour le DMSO, tu n'as peut-être pas assez pousser la concentration. Dans cette discussion ou une autre, Yoyo conseillais 10% DMSO, et autre chose dont j'ai oublié le nom, tu devrais peut-être essayer cela. J'essaye de retrouver son post.   [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restrictionest ce par électrophorèse.  [...] Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

C'est ce que jai fais car ce sont les questions précedentes et oui on retrouve les sites de restrictions, il suffit juste donc de faire ca Ca me semble trop simple ^^.  [...] effectivement, certaines enzymes de restriction générant des extrémités protrusives (par franches = blunt) peuvent être cohésives. Dans ce cas, généralement on ne peut pas recouper avec les 2 enzymes utiliser au début. Si tu peut trouver un livre de NEB (New England Biolabs) ou peut être sur leur site, tu as un tableau qui récapitule tout.  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

Le protocole de ceci comprend une première PCR pour produire ton gène d'interet à l'aide de primer possédant des extrémités suplémentaires contenant un site de restriction semblables à ceux présents sur ton plasmide EGFP.  [...] Tu produits et purifie ce fragments, puis tu le clive aux extrémités pour former les bouts colants, tu produits et linéarise EGFP de la même manière. Tu utilise une simple T4 ligase pour les rassembler et tu le produit en quantité suffisante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aflp

AFLP technique utilisé dans l'analyse genomique,son principe est le suivant.   [...] -ligation d'adaptateurs aux extrémités des fragments de restriction.  [...]

plasmide et BAMH1

j'ai répondu que les sites de restriction devaient être soit.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Pour ce qui est de l'insert... Je réalise une PCR avec primers modifiés, c'est à dire que j'ai ajouté le site de restriction à une extrémité du primer. Le produit de PCR a été cloné dans TOPO pour faciliter la digestion des extrémités (vérif par séquençage).  [...] En fait je digère avec XbaI (qui se liguera à SpeI en perdant le site de restriction donc) et avec SacII pour l'autre extrémité... Après digestion, extraction sur gel et purification, je procède à la ligation... et à mon avis le problème c'est ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Il ne faut pas oublier d'ajouter des nucléotides supplémentaires aux extrémités des oligos si on veut etre certains que les sites soient coupés.  [...] Pour introduire des amorces avec des sites de restriction en phase il faut rajouter deux nucléotides avant le site BamHI et deux nucléotides après le site de SalI ça sera comme suit.  [...]

Structure d'un phage

Mais sur mon schèma, ou se trouverait le site COS au niveau de la capside ou de la queue.  [...] Les sites COS sont de l'ADN, ce sont les deux extrémités simple brin de génome phagique. Et le génome est dans la capside.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe des banque génomique/cDNA

Etant donné que les sites EcoRI sont un peu partout au sein de ce génome, on se retrouvera avec des bouts de tailles différentes, ayant tous le même type d'extrémités. celles générées par EcoRI.  [...] C'est la révélation. Par ailleurs, je ne suis pas d'accord avec cette notion de par chance. quand on fait une banque, on s'arrange que la quantité de bouts soit telle que chaque bout soit représenté environ 5 fois en excès... Donc, il se trouvera forcément dans un vecteur.   [...]