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[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

Un possiblité en revanche est que tes protéines soient toxiques pour tes bactéries. Du coup seules celles qui expriment faiblement la produisent, les autres meurent. Dans ce cas le rendement est moisi. Une autre possibilité est que tes bactéries rejetent ta protéine dans des corps d'inclusions.  [...] Non, ce sont les DO que j'obtiens en 36h en milieu ZYP (auto-inducteur). Quand je fais avec du LB, j'iduis à DO environ 2 (50uM d'IPTG final) et je les arrête à environ 4-5 de DO (de toute manière, elle ne monte pas plus haut dans ces conditions). Le truc est que même dans ces conditions, je détecte la protéine en blot mais je ne la vois pas du tout en bleu de Coomassie.  [...]

Protéine recombinante, promoteurs du vecteur d'expression

Et même si ce n'est pas toxique, il vaut mieux induire à la fin, on a de meileurs rendements car la pousse n'est pas ralentie à cause d'une protéine surproduite et une meilleure gestion des nutriments.  [...] Pour ton gène bactérien, peut-être que c'est une séquence de type IRES, comme on les retrouve chez les eucaryotes, mais je ne sais pas si c'est valable pour les procaryotes... Il me semble mais je n'en suis pas sûr, je ne veux pas t'induire en erreur.   [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] et j'ajouterai que le fragment Fc permet d'augmenter le poids moléculaire de la protéine, évitant son élimination rapide par le rein et en favorisant son recyclage vers la circulation sanguine via des récepteurs aux fragment Fc présents quelque part au niveau du néphron.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine dimérique, comment on peut opérer Je pensais qu'on pouvait par exemple prendre deux plasmides et ajouter à la fin des deux gènes d'intérêt la thioredoxine.  [...] Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux. une seule chaîne est produite.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

je m'attends donc à avoir une augmentation d'expression de ma protéine dans les échantillons traités et dans le témoin 20% SVF et rien dans témoin négatif.  [...] Le phénomène se reproduit il dans une autre lignée Que se passe t il lors de la transfection avec un vecteur d'expression pour cette protéine.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fluorescence en tissus fixés

J'utilise un vecteur adénoviral pour exprimer une protéine dans le foie de souriceaux. Ce vecteur permet aussi l'expression de la GFP. Comme je fais des coupes pour l'histo, je me demandais si je ne pouvais pas en profiter pour vérifier la topographie de l'infection en regardant la fluorescence de la GFP.  [...] Question. la gfp reste-t-elle fonctionnelle apres fixation des coupes (PFA 4%) Sur la dernière série je n'ai rien vu mais les tissus avaient quand même souffert.   [...]

[Biochimie] Purification des proteines Linases dans la levure

Les pET sont des vecteurs d'expression prévus pour fonctionner en bactéries. Donc aller les mettre dans des levures n'est pas une bonne idée.  [...] Ensuite je me demande si vous avez pensé à induire l'expression de votre vecteur par l'IPTG. Parce que si vous ne mettez pas d'IPTG, la protéine n'est simplement pas produite.  [...]

[Biologie Cellulaire] vecteurs

Je voudrai savoir pourquoi à certains moments on utilise un vecteur qui va permettre l'expression transitoire d'un gène et à un autre moment un vecteur qui va permettre une expression constitutive du même gène.  [...] - le fait de pouvoir induire l 'expression d'un gène permet de s'assurer que le phénomène observé n'est pas lié à l'introduction du vecteur lui-même. ainsi, c'est uniquement au moment où l'on induit l'expression qu'il se passe quelque chose de significative, et quand on l'arrête, le phénomène n' a pas lieu.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

On veut donc fabriquer cette proteine de fusion qui est composé de deux domaines correspondant chacun a l'une des deux proteines d'interet et reliés entre eux par une liaison peptidique. Si elle se replie bien alors la proteine exprimera les deux propriétés (cool ).  [...] Normalement il n'y a pas de condon start apreès le promoteur, vu que ce genre de vecteur est pensé pour y insérer un codant. DOnc ta protéine commencera à ton AUG.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

Quelqu'un peut peut-être m'aider avec cette question un peu triviale. est-il possible de reproduire une protéine en ne disposant pas du gène qui la code.  [...] En d'autres mots et via un exemple, est-il possible de copier un anticorps monoclonal si l'on ne dipose pas de cellules productrices (mais bien de la protéine/anticorps en question et en quantité suffisante).  [...]