• Forum - Expression, Intérêt, Cellule

[Biologie Moléculaire] promoteur eucaryote

Est ce que ce dernier permet l'expression du gene d'interet dans une cellule eucaryote.  [...] Oui c'est ça. il permet l'expression du gène en amont duquel il est placé, dans une cellule eucaryote. On utilise souvent des promoteurs viraux, tel que celui de CMV (CytoMegaloVirus) puisque ce sont souvent des promoteurs fort, donc permettant une surexpression du gène.  [...]

vecteur d'expression

Bonjour à tous, soit une cellule hote transformée. Tant qu'elle n'a pas reçu de vecteur d'expression elle ne pourra pas commencer la transcription du gène d'interet.  [...] Le vecteur d'expression est en général un plasmide circulaire contenant le gène d'intérêt accompagné de tous les éléments nécessaires à sa transcription, une ou plusieurs origines de réplication et un marqueur de sélection (gène de résistance ou autre).  [...]

proteine ou cellule stable ???

Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...] Je vais te dire ce que je pense ( ce qui n'est pas forcément la pensée de l'auteur... ) les lignées cellulaires sont des lignées immortalisées (généralement par des virus comme le SV40, mais cette immortalisation n'est pas sans conséquence sur la cellule avec des changements de profil d'expression de gènes et beaucoup d'autres choses) dans l'article cité en ref 20 les auteurs ont utilisé un virus WT, alors que pour les COS-1 c'est un virus muté, le contexte de tes cellules n'est pas exactement le même ce qui pourrait entrainer ces différences de phosphorylations.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Je n'ai pas vraiment compris comment on fabriquait un vecteur d'expression. Je m'embrouille avec ces histoires d'enzymes de restriction et de gènes codant pour la résistance à l'ampicilline, etc.  [...] binase -) comme ça l'exogène ne va pas s'intégrer dans le génome de la bactérie en plus pour exprimer des protéines la souche doit être protéase - pour ne pas dégrader le produit d'expression.  [...]

[Biologie Cellulaire] Synchronisation cellulaire

je voudrais savoir quel etait l'interet de comparer un paramètre tel que la variation de l'expression d une prot dans le temps, entre une population synchronisée et une population cellulaire asynchrone en dehors de definir le taux d'expression dans une phase donnée, apres je ne vois pas.  [...] Suite à ta précision, je pense que l'interet de synchroniser une population ou un ensemble de population, c'est pour les comparer entre eux, et au dela d'un calcul de taux d'expression, c'est de voir aussi si temporellement ou localement il n'y aurait pas un facteur influençant une quelconque activité, surtout quand on parle de cycle cellulaire.  [...]

La reproduction du vivant est-elle mystérieuse?

La matrice nucléaire interagit fortement avec lui, contribuant à la régulation de son expression et de sa duplication. Les signaux extérieurs (environnementaux) aussi bien chimiques que mécaniques agissent aussi sur l'expression de gènes. L'ADN est au service de la cellule et de sa survie comme le sont tous les autres constituants.  [...] Autre argument. toute synthèse de membrane cellulaire se fait à partir d'une membrane préexistante... l'ADN est une acquisition plus tardive que la membrane. A mon avis, la séparation entre milieu externe et milieu interne est plus essentielle à la vie que le fait de posséder une molécule-mémoire centrale.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

C'est une question interéssante et j'avoue que je ne suis pas sûre de moi mais je n'avais pas la même idée que toi, pour moi la différence ne réside pas dans une expression stable ou prolongée. Pour moi, la transfection c'est utiliser des méthodes chimiques ou physiques pour introduire ton plasmide, comme des liposomes, ce qui n'empêche pas de distinguer une transfection stable et transitoire.  [...] Cependant sur le manuel de Promega il est dit que ce plasmide peut exprimé la protéine d'interet (que l'on aura eu soin d'intégrer) de manière transitoire ou permanente... Si c'est la séquence du plasmide qui permet ou pas son intégration dans l'ADN de la cellule, comment obtenir ces 2 sortes d'expression (transitoire/permanent) Quel facteur supplémentaire entre en jeu.  [...]

[Journal club] Immortalisation et Transformation d'une cellule humaine à partir d'éléments génétiques définis.

Les auteurs concluent que l'expression ectopique de l'antigène T, de H-Ras G12V et de hTERT suffit pour convertir une cellule normale en une cellule tumorigène. C'est la première tentative réussi de transformation tumorale dans une cellule humaine.  [...] De ce fait on a expression de la télomérase, une expression intermédiaire entre une cellule souche et une cellule différenciée, globalement. Ceci explique donc (cela ne regarde que moi ) que seules les HEK arrivent à former des colonies, à la différence des fibroblastes qui en sont incapables (puique étant des cellules différenciées).  [...]

le monde ARN

Dans la cellule humaine, l'adn est quand même le support de l'info génétique puisque c'est lui et lui seul qui porte tous les gènes, les arn dans la cellule ne sont là uniquement que pour jouer le rôle d'intermédiaire entre le code génétique et l'expression de ce code via l'arn.  [...] L'article dit juste qu'il n'y a pas intervention d'échanges acido-basiques dans la catalyse, pas que le catalyse n'a pas lieu ou qu'elle n'est pas le fait de l'ARN du ribosome. Comme je n'ai pas accès au texte intégral, ce que je dis est peut-être contredit par les auteurs dans celui-ci, mais l'impression que j'ai d'après le résumé est qu'ils ne réfutent pas du tout l'idée que le ribosome est un ribozyme.  [...]

[Biochimie] ARN interférent

On peut dire que le siRNA est lui-même un ARN interférent, cela signifie small interfering RNA. Il peut être introduit artificiellement dans la cellule, c'est ce qui est fait en laboraroire pour inhiber l'expression d'un gène, mais certains organismes ont des siRNAs endogènes.  [...] Sinon les siRNAs sont le produit du clivage d'un long ARN double brin (que l'on peut aussi considérer comme ARN interférent) par l'enzyme Dicer. Ce long ARN double-brin peut aussi être introduit articiellement par transfection par ex, mais il peut aussi provenir d'un virus à ARN, ou de la transcription d'éléments répétés inversés dans le génôme.  [...]