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[Microbiologie] mutagenèse dirigée par pcr

merci pour la réponse mais je tiens à vous informer que je vais effectuer une mutagenèse dirigée par pcr à partir d'un fragment d'adn qui n'a pas été préalablement inséré dans un plasmide tel qu'il est mentionné dans le kit pouvez vous me donner plus d'éclaircissement sur ce sujet.   [...] mon encadreur m'a demandé de ne pas passer par l'étape de clonage préalable, de muter le gène en question par la méthode des 4 oligos et de passer directement à l'étape suivante qui clonage transformation des bactéries compétentes pour exprimer le gène muté, moi aussi je me pose des questions parce que dans tous les articles que j'ai lu j'ai trouvé que les chercheurs ont procédé d'abord à un clonage après ils ont effectué trois pcr successives après ils ont passé à l'étape de transformation des bactéries moi je dois zapper la première étape je n'ai pas osé lui poser la question pour qu'elle raison à votre avis.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] Par pression de selection AB sur les bacteries, je vais pouvoir selectionner uniquement les colonies bact qui ont integrer mon plasmide (qui a un gene re resistance a la selection).  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Ou plutôt les bactéries étaient compétentes (électro- ou thermocompétentes) et vous avez fait une transformation avec vos plasmides recombinants au sein desquels vous aviez auparavant cloné un insert.  [...] Questions. jJe crois que je faisais une erreur en associant la transformation des bactéries et leur compétences. Quest ce qu'une cellule compétente C'est une cellule transformée.  [...]

[Biochimie] La fermentation Lactique.

Cependant pourquoi les industriels utilisent ces bactéries au lieu d'autres bactéries.Autres bactéries qui permettrait la transformation du galactose également et donc une acidification plus rapide du mélange et donc une action plus rapide sur la caséine et ainsi une coagulation plus rapide.  [...] Et puis la transformation de l'acide pyruvique en lactique se fait il uniquement en voie anaérobie dans ces bactéries Et si oui comment font les industriels pour respecter cette condition.  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

Ce n'est pas mon cas car mon controle de transformation est justement le plasmide contenant l'insert (fournit par le collaborareur qui est celui qui a été digéré et purifié sur gel) et les bacteries pousse.  [...] @flyingbike. mon expérience perso c'est que la ligation proprement dite est rarement le problème. Quasiment tous les problèmes de ligation que j'ai vu sont en fait des problèmes de restriction ou de transformation (bactéries pas suffisamment compétentes).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Donc effectivement, on peut avoir culture sur le contrôle puisque le vecteur est résistant à l'ampicilline (j'ai tendance à pas mal m'embrouiller avec tout ça). D'après ce que tu dis pour le contrôle négatif, un vecteur qui n'a pas inséré d'insert ne va pas entrer dans les bactéries lors de la transformation bactérienne et du choc thermique Le vecteur ne peut pas entrer seul dans les bactéries.  [...] La seule chose que je peux te dire c'est que la manip de transformation des bactéries par le vecteur seul a raté, et qu'un très faible nombre de colonies a donc pu se développer. Par curiosité, combien de colonies par µg d'ADN as tu obtenu dans le contrôle et dans la transformation avec vecteur + insert.  [...]

[Biochimie] Devenir de O et N dans la Matière Organique sédimentaire

Dans le cadre d'un projet pluri-disciplinaire de 1e année sur le thème Transformation, nous étudions les différentes étapes de formation géologique du pétrole qui découle des sédiments organiques (marins principalement) non consommés par la chaîne alimentaire dont les bactéries aérobies.  [...] Cette activité, principalement la fermentation méthanique, a apparemment pour effet d'extraire l'azote et l'oxygène de la matière organique qui se transforme ainsi en kérogène. Ceci est tout à fait cohérent dans la mesure où le pétrole contient principalement du Carbone et de l'Hydrogène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] Puis transformation de 20 µl de bactéries chimiocompétentes avec 8 µl de produit de ligation. Ca marche très bien mais tes conditions semblent assez proches, tu dis qu'une autre ligase a donné les premiers résultats donc c'est sur la bonne voie.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Okay...mais alors quel est l'intérêt d'être passé par des plasmides si on ne les intègre pas à des bactéries pour les cloner (transformation).  [...] Le reel clonage se situe en amont de la premiere manip. Il correspond en fait a une manipulation de l'ADN (en vue de l'insertion dans un plasmide par exemple). Evidemment, suite a ton clonage tu auras besoin de transformer des bacteries puis de verifier ton clonage (manip 1, 2 et 3).  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

es que cette étape de transformation nous permet seulement de vérifier la transformation, ou bien on peut éventuellement extraire et purifier ces plasmides.  [...] donc ma question exacte. es que on fait la transformation des bactérie pour vérifier la mutagènése, puis on transfert le reste du mélange de mutagénèse du bluescript vers POZ. OU BIEN on transfert le bluescript vers poz directement après la mutagènése avant de transformer nos bactéries.  [...]