• Forum - Enzyme, Restriction, Fragments

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...]

[Biochimie] génétique - endonucléases de restriction

Un ADN génomique contenant 40% de guanine est hydrolysé par une enzyme de restriction reconnaissant le palindrome AATT. Quelle est la taille moyenne des fragments générés par l'hydrolyse enzymatique.  [...] Donc la probabilité de trouver un site est (1/4) n avec n la taille du site de restriction. Ce genre de calcul vous amène à conclure qu'une enzyme telle que EcoRI génère des fragments de 4096 pb en moyenne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueurs dominants et codominants

l'enzyme de restriction coupe au niveu du site de restriction et doit générer 2 fragments de restrictions pour le homozygotes et les hétérozygotes.  [...] on sait qu'une sonde s'hybride avec le fragment d'ADN possédant une séquence complémentaire à la sienne, par établissement des ponts hydrogène. (dans le cas des RFLP par exemple) comment est ce que certains allèles sont visible et d'autre non.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

Pour cela il faut faire le découpage de l'ADN, grâce a des enzymes de restriction.  [...] En bref l'enzyme de restriction va permettre le clivage de l'ADN par rapport au site de restriction. Ensuite les fragments d'ADN sont séparés (ou différenciés) par électrophorèse.  [...]

[Biochimie] Mapping et Bal 31

This degradation is accomplished without the introduction of detectable scissions away from the ends of the duplexes. When this nuclease is used to produce a series of progressively shortened samples from a linear duplex DNA, subsequent digestion of these samples with a site-specific restriction endonuclease and analysis of the resulting fragments by gel electrophoresis permits the rapid establishment of the order of the restriction enzyme fragments through the entire genome.  [...] This is accomplished by noting from the electropherograms the order in which the various restriction enzyme fragments become noticeably shortened or disappear. Using this method, the five cleavage sites for the endonuclease Hpa I and the single cleavage sites for the nucleases Hpa II and Pst I have been mapped in PM2 bacteriophage DNA.  [...]

[Biochimie] RFLP, SNP et compagnie !

Si la mutation présente dans la maladie modifie également un fragment de restriction, en analysant les différents fragments obtenus après digestion par l'enzyme de restriction, vous pouvez d'une part savoir si l'individu a son site de restriction muté et d'autre part si il est hétérozygote ou homozygote pour le gène en question.  [...] Oui exact, autant pour moi. J'ai écrit trop vite ma réponse... ^^. Mais pour une étude d'un gène ou maladie on utilisera plus fréquement les SNP qui forment un RFLP non Comme ça, après avec PCR on peut facilement étudier ces polymorphisme et savoir si ils sont hétérozygote ou non pour un individu.   [...]

[Biochimie] Enzyme de restriction

Je voulais avoir une petite précision sur les enzymes de restriction. Dans mon exercice j'ai un tableau avec différentes enzymes de restriction et les séquences clivées correspondant a chaque enzyme. Cela veut dire que si j'ai par exemple pour une enzyme X, la sequence clivee.  [...] Je dirais plutôt que l'enzyme de restriction va cliver à l'intérieur de cette séquence et générer ainsi 2 fragments soit à bouts francs soit cohésifs. Elle peut cliver en plein milieu ou après un nucléotide ou trois nucléotides, tout dépend de l'enzyme.  [...]

[Microbiologie] enzyme de restriction

qu'elle est le but d'utilisé une enzyme de restriction qui donne des fragments d'ADN de grande taille (afin de réaliser l'electrophorse en champ pulsè ).  [...] Une autre question svp,généralement quant on isolent 50 échantillons par exemple d'une tel souche bactérienne,et on choisi que 6 souches afin d'étudier leurs génome.sur quoi se base le choix de ces souches précisément.   [...]

enzymes de restriction

bjr a tous,voila j'ai un exposé sur les enzymes de restriction un sujet dont j'ai quelques notions mais pas assez pour mon exposé.si l'un de vous peut me passer quelques liens sur le net ou les noms des ouvrages sur les quels je pourai trouvé ce que je recherche ca serait sympa.merci d'avance.  [...] créer une molécule de DNA (ex. plasmide) synthétique en recollant ensemble 2 fragments de DNA naturels coupés par une enzyme de restriction.  [...]

[Microbiologie] banque de gènes

mon encadreur m'a demandé de faire une banque de gène, est il possible d'obtenir plusieurs fragments de gène en faisant la digestion par une seule enzyme de restriction et comment.  [...]