• Forum - Digestion, Produit, ADN

[Biochimie] Calculer la taille d'un fragment dans une carte de restriction

Dans un exercice, on nous demande de calculer la taille des fragments d'adn produit de la digestion en utilisant les fragment d'adn marqueurs de taille.  [...] Du puits 2, tu vois que t'as deux sites de coupure ClaI dans ton plasmide + insert. Hors le plasmide seul n'en a qu'un. Conclusion, ton insert a aussi un site de coupure ClaI. Tu peux donc donner une position possible à ce site dans ton insert. Tu fais pareil avec PstI et ainsi tu pourras savoir la taille des différents fragments.   [...]

[Génétique] Tale nuclease

psk jusqu'a present j'en ai jamais entendu parlé, j'ai mis dans mon protocole qu'il fallait faire une transcription inverse a partie des construction de TALENs pour obtenir l'ADNc correspondant et pouvoir les clonés puis les transfectés dans des cellules eucaryotes.   [...] - extraction de l'ADN puis PCR avec des amorces specifique du gene d'interet puis digestion avec la nuclease T7 et migration sur gene d'agarose et comparaison avec le temoin ( le produit du digestion du gene d'interet sans l'action des talens).  [...]

Génie génétique

Afin de caractériser au niveau moléculaire la mutation hisD984, les ADN des souches LT2 ( souche sauvage d origine) et TR6238 ( souche LT2 modifiée contenant la mutation hisD984 après mutagénèse chimique) sont préparés et digérés séparément par différentes enzymes de restriction.  [...] ta sonde radioactive est ton M13Hol76. Il s'agit surement de portion d'ADN radioactif purifié. Elle est sans doute introduit dans ton produit de digestion avant de le faire migrer. Dans la logique, cette sonde se liera uniquement à ta souche sauvage.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...] Ta première enzyme ouvre le plasmide en coupant à un premier endroit. La seconde coupe à un autre site, et produit 2 morceaux de tailles différentes. d'où les 2 bandes.  [...]

Produit de PCR avant et après digestion

Une toute petite question, peut être simple pour vous. Quelle serait la différence si on met nos produit de PCR dans électrophorèse avant digestion et après digestion.  [...] Au fait je suis entrain d amplifier un gene qui code pour une prteine, j ai donc fait la PCR puis la digestion du produit et enfin je suis passée a l electrophorése pour extraite mon ADN.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Pour ce qui est du faible dosage du produit PCR je pense que j 'ai un peu dilué car je suis parti de 20 microlitre d'ADN aprés double digestion et purif(pertes) j'ai dilué dans 75 microlitres.  [...] L'avantage par rapport au produit PCR est que la on peut controler la digestion (passage du circulaire au lineaire) chose pas possible avec le produit PCR, donc jusque la j ai cloner avec l'INSERT issue de la double digestion à patir du plasmide,la derniére fois le dosage de cet insert purifié est de 10.2ng/ul.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

sur ce genre de manip c'est souvent la digestion du produit de PCR qui s'effectue mal. en effet les enzyme ont des difficulté pour coupes aux extremites un fragment d'ADN linéaire.  [...] Pour ce qui est de l'insert... Je réalise une PCR avec primers modifiés, c'est à dire que j'ai ajouté le site de restriction à une extrémité du primer. Le produit de PCR a été cloné dans TOPO pour faciliter la digestion des extrémités (vérif par séquençage).  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

As-tu plutôt digéré ton plasmide (DpnI avec plasmide) puis fais une étape de ligation pour lier ton produit de PCR au plasmide (avec une ligase).  [...] Je fais donc effectivement la digestion sur mon produit de PCR qui n'est autre que mon plasmide...(en théorie, si tout se passe bien).  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai fais une extraction d'ADN puis je l'ai mis en présence d'enzyme de restriction ( c'est le TP basique avec les enzymes BamHI, EcoRI, HindIII) c'est de l'ADN de phage lambda cependant comment savoir si l'ADN a été digéré par élélectrophorèse sur gel d'agarose car j'observe plusieurs fragments mais je comprends pas trop si quelqu'un peut m'éclairer merci infiniment.  [...] D'accord donc si j'ai bien compris si je n'obtiens pas de fragments, c'est à dire que je reste avec la molécule d'ADN de départ ça veux dire qu'il n'y a pas eu digestion, alors que si je trouve plusieurs fragments qui sont à des positions différentes car migré de manière différente ça veux dire que mon fragment d'ADN initial a été digérer c'est ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN et digestion enzymatique

Je suis actuellement en train de rédiger mon compte rendu de TP concernant une extraction d'ADN et une digestion enzymatique par 3 enzymes (EcoRI, BamHI et HindIII), en faisant le TP, notre professeur ne nous a pas vraiment expliqué, je dirais même qu'il n'a donner aucune information.  [...] Je les ai légender après en fait et pour le deuxième le professeur dit que les bandes juste en haut qui sont très claires sont de différentes tailles mais il a rien dit de plus, théoriquement nous devrions avoir une deuxieme bande en bas mais je suppose aussi qu'il n'y avait pas assez d'ADN.  [...]