• Forum - Digestion, Plasmide, Résultats

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction d'un plasmide

Voila je n'arrive pas à comprendre la méthode pour établir une carte de restriction. J'ai essayé de chercher dans les livres, sur internet mais rien n'y fait.   [...] La digestion du plasmide par Pst1 et EcoRV donne les résultats suivants.  [...]

[Biologie Moléculaire] problemes de digestion de plasmides

[Biologie Moléculaire] problemes de digestion de plasmides.  [...] j'utilise un plasmide pET 28a pour faire un clonage chez coli mais les différente digestion de ce ce plasmide par EcoR1 Hind3 Xba1 Kpn1 incuber plus ou moins longtemps ne me permette pas d obtenir une digestion correcte. quelqu un a déjà eu ce genre de résultats comment y palier comment l'interpréter.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu un TP de biotechnologie où on a fait une électrophorèse sur gel d'un plasmide purifié non digéré et d'un plasmide purifié dirigé par deux enzymes de restriction.  [...] J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...]

plasmide -digestion par enzymes de restriction

On me dit que je dois dessiner un plasmide après sa digestion par Xho I et Nco I (déterminer les extrémités du plasmide) et je suis incapable de le faire parce-que je comprends ce que je dois faire ni quels outils utiliser.  [...] Tu digères un plasmide lorsque tu veux modifier ce dernier, y rajouter un fragment ou en retirer un. On passe avant tout par cette étape de digestion. Après tu as un étape de ligation si éventuellement tu veux recirculariser le plasmide après y avoir insérer un fragment entre XhoI et NcoI.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

Ensuite chacun de nous, avec le plasmide censé etre identique, l'avons soumit a 2 restrictions avec chaque fois une seule enzime et on a obtenu des résultats différents.  [...] Combiend e site de coupe a le plasmide pour chaque enzime je pense a 2 pour BGIII au vu des résultas dans les pistes 2 et auncun pour PVUII (vu que le plasmide migre a la meme hauteur que le plasmide mon pote sans digestion) Cela voudrtait dire que les bandes dans les pistes 2 et 3 correspondent au plasmide linéarisé mais pourquoi n'ont -ils pas migré à la meme hauteur.  [...]

[Biochimie] Echec de la Transformation Ecoli

J'ai fait 6 transformations sur les Ecoli électrocompétentes hier. Pr controler, j'ai fait un miniprep,puis déposer l'ADN plasmidique sur gel d'agorose, j'ai trouvé la bonne taille de plasmide, la méthode que j'ai utilisée pr la transformation est L'electroporation, la machine est BioRAD Pulse Controller Gene Pulser.  [...] Actuellement, j'ai lancé une digestion enzymatique sur ces plasmides provenant d'un miniprep puis je les déposerai sur gel pr voir la taille exacte, car il y a bcp de formes superenroulé, relaché etc pr un plasmide. j'aurai le résultat dans 5 heures.  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

Je n'ai pas essayé de déphosphorylé, cependant, j'essaye actuellement en parallele un clonage qui ne necessite pas de déphosphorylé le plasmide (digestion par deux autres enzymes generant des exttrémités non compatible afin que le vecteur ne se referme pas).  [...] C'est vrai que sur gel apres digestion les inserts sont assez faible par rapport au reste de plasmide, est ce que le fait d'augmenter le temps de digestion pourrai augmenter mon taux d'insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

Pour Piwi, merci mais j'ai du mal m'exprimer pour la double digestion je n'obtien qu'une seule bande située entre 2500 et 3000, c'est ca que je n'arrive pa à interprété sachant que la taille de mon plasmide est de 6000.  [...] .. Dans la double digestion si mon hypothèse (les 2 enzymes bamHI et ecoRI coupent au même endroit), j'aurais 2 fragments identiques dans mon plasmide ce qui ne coincide pas avec la digestion de EcoRI. Et pourquoi mes 2 enzymes auraient-elles coupées au même endroit.  [...]

calcul dilution plasmide

dans le protocole que j ai en nous demande de prendre 5ug du plasmide la concentration de mon plasmide quand je l ai verifier au nanodrop est de 43ng/ul.  [...] ou carrément reconcentre mon plasmide car sa donne 116ul et le volume final dans le protocole doit etre de 100ul donc c impossible.  [...]

[Biologie Moléculaire] PB ADN dans le puit d'agarose

Je commence mon 1 er clonage, donc pour faire court j'ai coupé mon vecteur avec une enzyme de restriction ApaI, qui devrait le linéariser.   [...] Après digestion, j'ai fais migrer mon plasmide coupé versus le non coupé et j'obtiens bien les 3 formes du plasmide non coupé, mais par contre mon plasmide coupé avec ApaI est resté dans le puit, j'ai refais la digestion est même chose.  [...]