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[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne

[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne.  [...] Je travaille sur une proteine des pili bactériens en utilisant pour isoler cette protéine (sous-unité pilE du pilus) 2 méthodes. l'extraction à la guanidine (détergent) et la digestion à la papaïne (enzyme protéolytique). Est-ce que quelqu'un saurait quelles autres applications il y aurait pour ces 2 méthodes ou autrement quelle est leur action, au niveau moléculaire.  [...]

Transfection et récupérer protéine

Le problème est que les protéines membranaires sont généralement très hydrophobes et n'aiment pas du tout être extraites des membranes. ca risque d'être pas mal galère pour trouver les bonnes conditions de purification.  [...] Il faut faire attention lors de la synthèse, choisissez bien votre promoteur, cherchez dans la littérature il doit exister des constructions particulières pour les protéines membranaires. Faites également très attention au détergent que vous utiliserez lors de l'extraction pour essayer de la garder votre protéine la plus soluble possible.  [...]

additifs pour la cristallisation des proteines membranaires

En effet on utilise des détergents pour extraire la protéine membranaire, car ils solubilisent la membrane et rend la protéine soluble en protègeant la ceinture hydrophobe de la protéine (les détergents sont chimiquement très proches des lipides), et il y en a de toutes sortes.  [...] Oui effectivement, la GlpG est une proteine membranaire, son extraction de la membrane necessite un détergent, et dans l'article on parle de la solution tampon Hepes, NaCl, Glycerol,... je pense que c'est le detergent en question si on se réfère à http.//biochimiedesproteines.espacew...oke.ca/5d.html.  [...]

Isolat de protéines

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20).  [...] Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.  [...]

[Identification] Trypsinisation avant 2D-LC-MS/MS : CaCl2 ?

Dans mon protocole de trypsinisation de solution, j'utilise du PPS (pour ses propriétés détergentes compatibles MS/MS) et CaCl2 (1mM). Mais je ne comprend pas pourquoi j'utilise du CaCl2.  [...] Ps. Je travaille sur des cellules d'Arabidopsis thaliana, j'ai fait l'extraction protéique par précipitation au TCA (j'ai utilisé de l'urée comme détergent). Après ma trypsinisation, je fais du 2D-LC-MS/MS.  [...]

[Biochimie] Sodium Deoxycholate

Application Anionic detergent. useful for extraction of membrane receptors and other plasma membrane proteins and for nuclei isolation.  [...] a mon avis c'est un détergent qui permet au Xgal de pénétrer dans les cytoplasmes pour pouvoir être transformé par la ß-gal. Un peu comme en immunohisto ou on perméabilise au triton ou au tween pour laisser rentrer les anticorps.  [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

100% d'accord. Après comme tu le dis, délicat dosage extraction - solubilisation - protection. Tu devrais essayer sur des échantillons qui ne sont pas précieux à quelle limite de détergent tu arrives à solubiser ton récepteur.  [...] J'ai trouvé ce détergent. N-dodecyl-ß-D-maltoside, savez-vous s'il conserve les interactions entre deux prot membranaires (récepteur canal + protéine régulatrice) Car j'ai malheureusement lu que le CHAPS casse les interactions entre les protéines membranaires, donc ce n'est pas bon pour moi ( Useful for solubilizing membrane proteins and breaking protein-protein interactions ).  [...]

Solubilité des protéines et role d'un acide biliaire

Ca a quelque chose a voir avec le fait que les détergent détruisent les membranes biologiques Car dans ce cas l'utilisation de détergent permet de séparer la protéine de la membrane dans laquelle elle se trouve pour la mettre en solution.  [...] Les détergents ioniques ont pour but de déchausser les protéines des membranes en les recouvrant de charges, les séparant de ce fait. Pour l'action des solvants organiques sur les membranes, cf nos amis chimistes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation

En gros, j'arrive a sortir une petite bande sur mon western-blot mais ça représente un fifrelin. J'ai essayé divers tampons de lyse mais j'évite tout de même avec détergent ionique car le but final est de mettre en évidence des partenaires de cette protéine.  [...] Ma protéine est nucléaire et sous forme insoluble associée à la chromatine, et je me dis que le probléme doit certainement venir de là. Devrais-je faire un petit traitement à la DNase1 pendant la lyse peut être tenter un détergent ionique ou encore sonicer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Compréhension d'article.

1- Je ne comprend pas l'action du détergent (n-octylglucoside) dans la fig.4. Je me demande si détergent permet l'entrée du CYP3A4 dans la cellule ou bien il facilite l'ancrage de cette protéine dans la membrane du microsome ou encore il permet de fluidifier la membrane et donc de faciliter l'intéraction entre UGT2B.  [...] 2- En quoi le fait de savoir que le coeur de la protéine est stable et qu'il y a une relaxation des chaînes latérales, permet de dire que les conditions sont réunies pour simuler ConA Native.  [...]