• Forum - Detection, Coloration, Protéines

[Biochimie] Electrophorèse colorée à l'argent

Je fais en ce moment des électrophorèses au nitrate d'argent et j'essaie de déterminer la limite de détection de ce type de coloration pour différentes protéines (BSA, collagène...).  [...] Je voulais savoir si, pour colorer à l'argent, le nitrate d'argent est le seul réactif possible. Je dispose en effet d'acétate d'argent, puis-je faire quelque chose avec ça.   [...]

Biuret_Bradford_spectrophotomé trique:avantages et inconvénients?

Biuret. limite de détection élevé (moins performante), facile à mettre en oeuvre, coloration independante de la composition en AA.  [...] Bradford. coloration dependante de la composition en AA, limite de détection beaucoup plus faible (méthode performante), interference parfois nombreuses.  [...]

[Biochimie] Détection des proteines d'une solution acqueuse.

Je dois élaborer un test afin de détecter et quantifier la présence de proteines et d'acide aminés libres dans une solution acqueuse.  [...] c'est le bleu de coomassie, un colorant, qui absorbe à 595nm lors de sa complexation avec les protéines (residus aromatiques et hydrophobes je crois).  [...]

[Biochimie] Purification de la beta-gal

On mélange avec le cône du Pipetman et on note l'intensité de la coloration caractéristique du nombre de molécule de bleu de Comassie liées avec les protéines.  [...] C'est ici que je bloque un peu... pour les fractions 1, 2, et 2 j'ai pas de coloration bleu (ça veut dire que j'ai pas de protéine mais bizard parce-que je suis censé avoir des protéines chargées + et neutres... donc je vois pas trop comment interpréter ce résultat).  [...]

Détection de protéines mal repliées par western blot?

Si ce n'est que pour une protéine, cela doit être possible de voir un changement de taille de la protéine en condition non dénaturante. Une protéine mal replié étant généralement plus grande que celle bien replié, elle migrera moins vite. Mais l'insuline est vraiment petit en taille, et je ne sais pas s'il est possible de voir clairement un tel changement de conformation.  [...] Si votre objectif est ensuite de regarder toute les protéines (donc le protéome), le DIGE -2D (2 dimensional difference gel electrophoresis) est probablement la technique la plus adapté (toujours en condition non dénaturante).  [...]

Transcription or not transcription

Les tetracyclines et macrolides sont des ATB qui inhibent la synthese peptidique. Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non.  [...] Si tu as un problème à détecter les ARN, ca vient peut être de la détection en elle même. En passant par une détection des protéines (électrophorèse 2D), tu pourrais voir si il y a un changement au niveau de le synthèse des protéines. Ca ne t'aide peut être pas directement pour ta technique, mais ca peut permettre de vérifier si c'est un problème de méthode ou de principe.  [...]

Levures et TAP tag à grande échelle

Dans mon cours en revanche, c'est écrit que le but du TAP-tag à grande échelle est d'assigner des fonctions aux protéines et de voir leurs interactions... En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...] La technique est utile pour émettre des hypothèses sur la fonction d'une protéine inconnue. en trouvant dans un même complexe des protéines de fonction connue, on peut avoir une idée de la fonction de la protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] coloration nitrate argent

je viens chercher de l'aide pour un problème de coloration au nitrate d'argent. J'essais de valider un protocole de coloration au nitrate d'argent donc, pour colorer des protéines sur un gel d' agarose.  [...] Mon problème est que je ne visualise pas mes protéines, je vois juste monter le bruit de fond sur le gel. (étant en phase de test je fait migrer de la BSA, et la partie éléctro en elle-même a été validée par coloration au bleu de coomassie).  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'immunoblot ou Western blot est une méthode qui permet la détection et l'identification de protéines spécifiques dans un échantillon biologique.  [...] La différence d'exposition permet de voir si de nouvelles bandes apparaissent. Par exemple, tu peux voir sur le temps d'exposition long des bandes qui sont invisibles sur le temps d'exposition court (car la quantité de protéines correspondant a cette bande est faible, voir figure 4 gel E).  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytoenzymologie

Bonjour, je voudrais savoir à quoi sert la cytoenzymologie.   [...] Ce sont des méthodes de détection des enzymes in situ qui les révèlent par leur activité et non pas par leur présence. La visualisation permet de préciser la localisation intracellulaire de l'enzyme. soit directement (oxydo-reductases), soit indirectement par coloration (hydrolases).  [...]