• Forum - Contrôle, Positif, ARN

[Biologie Moléculaire] Est-il possible d'effectuer une PCR directement à partir d'ARN ?

Dans le cas d'une RTPCR, à quoi sert le controle positif ARN ( contamination par ADN.  [...] Oui c'est le but du controle positif, on fait une PCR sur le tube avant la RT, ainsi si y a ampli c'est qu'il y a de l'ADN dans ton échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] In situ d'oursin et sonde ARN

il y a 1 mois j'ai réalisé mon premier in situ avec comme sonde ARN un gène dont on connait le patron d'expression de manière à expérimenter la technique mais aussi pour me servir de ce gène comme controle positif.  [...] j'ai donc recommencé avec les sondes ARN des gènes à tester ainsi que mon contrôle positif mais je n'obtient aucune coloration même pour le contrôle +.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Ton prof voulait probablement dire qu'a l'issue d'une reverse-transcription (RT) suivie de PCR. si le résultat est négatif, a priori c'est qu'il n'y a pas d'ARN et il est positif que s'il y en a (sous réserve d'un contrôle ou l'on amplifie l'échantillon sans passer par RT, pour vérifier l'absence d'ADN dans la préparation avant la RT).  [...] Pour résumer, tu peux utiliser la RT-PCR pour détecter indirectement la présence d'un ARN. Attention toutefois, tu ne peux conclure a l'absence de ton messager qu'en ayant fait un contrôle positif te permettant de discriminer entre l'absence de messager et le non fonctionnement de l'expérience.  [...]

[Biochimie] Témoin de RT-PCR

Suite à une extraction d'ARN, j'ai fait une PCR,j'ai utilisé de l'ADNc c-fos et ARNr 18s comme témoin positif. (Dans le cadre du controle de c-fos (ARNm)).  [...] 18s peut te servir a normaliser ton expression de c-fos. Il est d'usage, lors de la RT-PCR, de faire un témoin ne contenant pas d'enzyme, et de le passer en PCRq. il permet de s'assurer que l'amplification de PCRq est spécifique de l'ARNm transformé en ADNc et non de l'ADN génomique.   [...]

[Biochimie] Expression protéique

La protéine est détectée par Western blot et le contrôle positif est correcte. A quel niveau sont sensé agir les régions régulatrices Lors de la traduction N'est ce pas un peu tard une fois que les ARNs sont synthétisés.  [...] L'ARN semble suffisamment exprimé puisqu'il est détecté assez clairement avec 30 cycles d'amplification. Sur WB j'obtiens deux bandes de tailles différentes pour mon contrôle positif mais seulement une bande très très haute dans le gel (très grosse protéine) comparé aux autres dans le reste de mes conditions.  [...]

[Biotechnologie] bêta actine dans la PCR !!

En ce moment, j'analyse un article qui traite l'échinococcose du point de vue immunité et culture cellulaire...pour détérminer les cytokines impliquer dans la réaction immunitaire...je fais donc une PCR et je rajoute des amorce d'IFN, TNF, IL et aussi la bêta actine.   [...] si c'est une RT-PCR classique la béta actine sert de controle positif, le gène est forcément exprimé donc tu dois avoir une bande pour ce gène ceci te permet de conclure sur les autres gènes notamment dans le cas ou tu n'as pas de bande tu ne peux pas dire que c'est parce que l'ARN était dégradé etc car l'actine marché.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

Si j'ai bien compris, on a effectué le controle positif durant la reaction de end conversion qui est = 2uL des produits de la PCR +X uL de Nuclease-free Water+0.5 uL de End conversion mix.Le controle positif se fait en remplacant les produits de la PCR par le blunt vector control insert.  [...] Si j'ai bien compris le TP (en anglais...) vuque le test positif n'a pas marché avec pT7Blue plasmide, on a donc utiliser pBluescript, mais je n'en suis pas sure... En cas de controle positif du kit commercial negatif, il faut donc changer le vecteur A quoi peut etre dut cet echec.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

A partir du moment ou la spécificité de ton amplification d'ADN champignon est avéré, il me semble que tu peux en conclure que ton échantillon est positif pour ce champignon. même en faible quantité, ce dernier est présent et se multiplira de toute façon.  [...] L'utilisation en PCR des séquences ITS (ADN) dites universelles ont la même utilité que les séquences 18S (ARN) en RT-PCR, à savoir valider la présence d'ADN dans ton échantillon, leur qualité, et éventuellement normaliser tes dépôts. C'est un contrôle positif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Après il est aussi possible que les contaminations observées ne proviennent pas d'un des réactifs mais simplement du fait de la manipulation de l'ADN a proximité du contrôle négatif. Ca peut expliquer pourquoi dans une PCR sans ADN tout soit blanc.  [...]

[Biologie Moléculaire] virus à ARN négatif?

La conversion en ARN positif indispensable à toute traduction est-elle une inversion du message, ainsi les ARN positif et négatif sont strictement complémentaires.  [...] L'ARN positif est un ARN qui peut être traduit directement en protéine. L'ARN négatif, lui, ne peut pas être traduit en protéine et il est complémentaire à l'ARN positif.  [...]