• Forum - Concentration, ADN, Référence, Bandes

[Biologie Moléculaire] dosage d'ADN sans spectrophotomètre

Je souhaiterais savoir si dans le cas où l'on ne dispose pas de spectrophotomètre, serait-il possible de doser la concentration de nos ADN en les faisant migrer avec un ADN de référence dont les bandes ont une concentration connue.  [...] Dans tous les cas, je te conseillerais de quantifier les bandes de ton gel avec un logiciel comme ImageJ si tu veux avoir la meilleure approximation possible de ta concentration.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Sinon, la séparation des bandes dans l'ADN dépend de la concentration d'agarose. plus l'agarose est dilué, plus les petites molécules d'ADN vont migrer vite. Ca peut peut-être réduire la résistance totale du circuit.  [...] Sinon, abaisser la concentration d'agarose a 0.8 ou 0.6 (attention ca fond tres rapidement...) ou changer ton marqueur, certains donne des bandes a 100pb puis 200, 300 etc, pas besoin de migrer bcp pour voir un resultat.  [...]

Estimation concentration gel agarose

Bonjour à tous, je vous contacte car lors d'un TP j'ai réalisé une electrophorese sur gel d'agarose pour estimer la concentration d'un ADN mais je n'ai pas bien compris comment estimer cette concentration.  [...] sans expérience il est aussi possible d'approximer en faisant une pseudo gamme a partir de concentrations d'ADN connues et comparer les tailles des bandes de quantité connus avec la taille de ta bande de quantité inconnue, mais c'est vraiment pas précis et pas pratique, en gros je pense que c'est la raison pour laquelle tu as mis plusieurs quantité de geneRuler, tu regarde a quelle taille ta bande inconnue correspond par rapport au geneRuler et  [...] totale et a ce moment tu divise par le volume du tube) puisque tu as la quantité d' ADN dans le tube de Ruler (quantité par microlitre) et que tu sais le volume que tu as déposé (2, 4 ou 6 microlitres), tu connais la quantité d' ADN pour chaque epaisseur de bande de Ruler que tu as déposé et ensuite tu en déduis la quantité de ta bande inconnu par rapport a la taille de la bande de chaque ruler dont tu connais maintenant la quantité déposée en nanogramme et la taille de ta bande de concentration inconnue,  [...]

[Génétique] Retard sur gel

En gros les retards sur gel sont assez chiant a interpreter, c'est pour ca que tu dois faire une piste d'ADN sans proteine, et differentes concentration de ta proteine. Sinon tu ne peux pas conclure grand chose.  [...] en fait ici j'ai 2 sites de fixation sur l'adn c'est cela la méme protéine peux donc se fixer sur 2 sites différent sur l'adn ( à méme ou différente affinité bien sur).  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Pour la diférence de taille de l'ADNc par rapport à l'ADNg je pense que justement ce dernier contient à la fois des exons et des introns, donc après la digestion les fragments d'ADNg seront plus longs.   [...] De plus sur la difference de taille cela est suspect car je parle bien seulement de la region 5' UTR donc qui ne contiendrait normalement pas d'exon ou d'intron ou alors dans mon hypothese la plus vraisemblable le premier exon et une partie du premier intron.   [...]

[Biochimie] detection de l'epo

j'ai un dossier à faire sur le dopage sportif à l'EPO et j'aimerai savoir comment on détermine quantitativement l'EPO recombinante après l'électrophorèse sur gel.   [...] Une solution éventuelle et de faire co-migrer sur le gel de l'EPO recombinante, à différentes concentrations connues pour chaque piste. Après quantification de l'intensité des bandes (si vos bandes sont quantifiables) vous tracez une droite Intensité = f(concentration) et ainsi vous connaissez la concentration en EPO de votre échantillon, en la ramenant sur la quantité déposée.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...] on travaille en conditions dénaturantes pour éviter que les structures secondaires (ADn ou prot)n'interfèrent dans la migration ou qu'on ait deux bandes au lieu d'une.  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'ADN non amplifié??

J'ai effectué une PCR certaines amorces ont été révélées incompatibles chez certaines souches, cependant seul quelques souches montrent après analyse sur gel des amplifiats des bandes correspondant à l'ADN (vérifié par la taille correspondant à celle de l'ADN mis au départ), ma question est pourquoi cette bandes n'apparait pas chez les autres souches.  [...] Merci d'abord pour ta réponse, c'est vrai que l'amorce est incompatible, c'est une possibilité, c'était une RAPD, il s'agit d'ADN total extrait, et le problème c que d'autres souches sont négatives sans monter cette bande d'ADN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dosage protéines dans du glycérol ?

J'ai un problème. on m'a donné un tube d'anticorps (sérum immunopurifié) qui m'intéresse beaucoup mais je ne sais pas quelle est la concentration précise en anticorps (on m'a dit entre 100 et 500µg/mL, c'est large) et j'en ai besoin.  [...] sinon tu déposes un gamme d'anticoprs de concentration connu, et ton anticorps (a différentes concentration). tu fais une coloration au coomassie, et tu compares l'intensité des bandes au densitomètre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr 16s ADNr qui présente des hybridations non spécifiques!

je suppose que tu as fait varier la concentration d'amorces Oui c'est possible que ça limite la formation de brins complémentaires en diminuant la concentration, ou que l'intensité des bandes diminuent.  [...] Tu peux aussi faire varier la concentration de MgCl2. Là je dirais plutôt la diminuer, pour limiter l'annealing aspécifique.  [...]