• Forum - Coloration, Culture, Bactéries

[Biochimie] Transfert western blot raté

Je souhaite induire une protéine à partir d'un système procaryote (en E.coli) grâce à l'IPTG. J'ai donc fait des tests d'inductions sur des petits volumes de culture (5ml). J'ai lysé mes bactéries puis déposé la fraction totale sur gel SDS-PAGE. Après coloration j'ai pu déterminer que ma protéine d'intérêt était induite (taille estimée 74 kDa).  [...] ..je vois les bandes de mes poids de marqueur moléculaire coloré qui sont de travers comme s'il y avait eu un transfert en diagonale, de plus les bandes semblent s'étaler et sortir de leur piste comme si elles avaient transférées de côté.   [...]

[Microbiologie] Microorganismes et Qualité de l'eau

Également je recherche des protocoles de méthodes de numération. Est il possible d'utiliser des cellules de Thoma, pour des bactéries Et existe il d'autres méthodes, ne nécessitant pas obligatoirement d'une mise en culture.  [...] Donc il vaut mieux faire une culture pour les bactéries, et pour identifier une souche particulière, il faut l'isolé sur une gélose sélective, suivie par quelques tests biochimiques (catalase, oxydase,...) et parfois on effectue même un sérotypage comme pour le cas des salmonelles, et bien sur une observation microscopique en utilisant des colorants comme pour la coloration de Gram, état frais et Ziehl-Nielsen.  [...]

[Microbiologie] comment maintenir une souche bactérienne?

Eventuellement, pour pr évenir des contaminations, les conserver à -80°C dans une solution de DMSO à 10% final (10% de DMSO, 90% de culture bactérienne en phase stationnaire) ou envelopper tes boites de parafilm.  [...] Le protocole pour la coloration de gram stipule que la culture doit être de maximum 48h sinon les bactéries sont plus sensibles à la décoloration. Pensez-vous que le fait de les stocker à 4°C me dispense de cet impératif.  [...]

bacteriologie

J'espère que quelqu'un sera en mesure de me répondre. Peut on réaliser une coloration de gram à partir d'une culture bacterienne faîte sur milieu BCP.  [...] Ou seuls les milieux tels que gélose TS peuvent être utilisés.   [...]

Bactérie

J'aimerais savoir quelle est la différence entre des bactéries gram + et gram -. Je sais qu'il y a une différence selon la coloration de Gram mais j'aimerais avoir plus de détails sur les membranes.  [...] La paroi est une structure rigide, responsable de la forme des bactéries, et leur permettant de résister à la lyse osmotique. Elle est pr ésente chez toutes les bactéries à l'exception des mycoplasmes. Sa structure varie selon les bactéries et conditionne leur aspect après la coloration de Gram.  [...]

Membrane, enveloppe, paroi?

IV) Bain coloration rouge. Met en évidence les bactéries ou le cristal violet et sorti (puisque on a besoin de les vois physiquement, sinon elles restent transparentes.).  [...] Certaines bactéries restent insensibles à la coloration Gram comme par exemple les Mycobactéries(Tuberculose,lè pr e..) puisque leur paroi est un peu différente, très riche en lipide complexes ramifiés avec de longues chaînes de carbone, ils sont liés au PDG et dirigés à ultérieur.  [...]

[Biochimie] Purification des proteines Linases dans la levure

Les pET sont des vecteurs d'expression prévus pour fonctionner en bactéries. Donc aller les mettre dans des levures n'est pas une bonne idée.  [...] Une fois votre induction effectuée le mieux à faire est de prendre un aliquote de votre culture bactérienne et de le faire migrer dans un gel acryl pour voir si une bande est induite (controle, la culture bactérienne non induite ou non transformée). Vous colorez le gel avec ce que vous voulez (amidoblack, rouge ponceau, coomassie, bleu colloïdal, instant blue, je déconseille la coloration à l'argent en première approche) et vous cherchez votre bande.  [...]

[Microbiologie] Coloration Gram

Oui, c' vrai ce qu'a dit Anetheron, car l'operation peut s'arrèter aprés l'utilisation d'alcool et on aura des bactéries Gram+ en violet et des bactéries Gram- décolorées, mais la derniere étape (contre-coloration par la safranine ou la fuschine) a pour but de redonner aux bactéries Gram- précédemment décolorées une teinte rose permettant de les visualiser au microscope.  [...] La capsule n'est pas non plus colorée au Gram, mais tu peux la distinguer si tu as de bons yeux ou un reste de coloration sur le fond de ta lame. Je pense que cette fois c'est une question de fixation du colorant, puisque les bactéries à l'intérieur sont colorées normalement.  [...]

[Microbiologie] coloration de Gram

bjr, j'ai lit sur la coloration de gram pour classer les bactéries gram + et -, c que j pa comprit c'est aprés le lavage avec l'alcool éthylique à 95 les germes non décolorés par l alcool apparaissent par conséquent violets au microscope et sont dits à gram +, mais les germes décolorés on dit pas directement gram - mais on modifiant une autre coloration avec la fuchsine pourquoi cette modification et on ne dit pas directement qu elles sont gram - puisqu'elles sont décolorés.  [...] Pour répondre à votre question, après la première coloration, TOUTE les bactéries sont colorées. L'alcool décolore ensuite les bactéries Gram-. Mais il est très difficile de voir des bactéries sans coloration (donc les Gram-) au microscope. Pour les voir facilement, on les colore alors, mais avec une autre couleur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

Est-ce que j'ai une contamination une bactérie quelconque résistante ampicilinne Comment ai-je pu contaminer...sachant que je travail sous une hotte, avec des gants et bien proprement Apparement il ne s'agit ni des boites, ni du milieu de culture, ni du SOC...je ne comprend pas.  [...] Et pour la coloration verte, peut-être que l'intégration a eu lieu dans un gène codant pour une protéine impliquée dans une voie du métabolisme. Si cette protéine n'est plus produite à cause de la recombinaison, elle ne peut plus faire son boulot et il y a peut-être accumulation d'un métabolite vert dans les bactéries (cette protéine est donc probablement non essentielle).  [...]