• Forum - Colonies, Boîte, Cellules, Culture

[Génétique] Taux de survie ; mutagenèse

Notre matériel est une souche mutante ORT128 de Saccharomyces Cerevisiae, mutée pour le gène h de la chaine de biosynthèse de l'adénine, se qui la rend auxotrophe à l'adénine et lui confère également une couleur rouge-orangée (arrêt à production d'Amino Imidazole Ribotide de coloration rouge).   [...] Dans notre boite témoin, au bout d'une semaine nous avons pu comptabiliser 24 colonies, comme à l'origine une colonie est une cellule qui se fixe et se divise alors nous y avons mis 24 cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Après culture sur milieu sélectif additionné d'ampicilline, on a obtenu plus de colonies pour notre clonage que sur la boite du contrôle (il y avait des colonies sur la boite du contrôle, normalement il devrait pas ne pas en avoir ). Je n'arrive pas à comprendre exactement pourquoi nous avons eu plus de colonies et ce que nous devrions retrouvés sur la boite de contrôle.  [...] Les 800 colonies obtenues sont bien celles qui ont le vecteur+insert n'est ce pas Quel marqueur utilises tu pour les différencier de celles qui ne possèdent que le vecteur sans l'insert Ex. lorsque l'insert contient LacZ (le gène codant pour la béta-galactosidase) une culture sur milieu contenant du Xgal permet de reconnaitre les bactéries qui ont l'insert car elles sont bleues.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

On me demande de calculer la compétence des cellules. nombre de colonies/ microgrammes d'ADN. mais je ne vois pas trop d'où vient le plasmide pu en quoi cest un test de compétence.  [...] Ce que tu fais c'est que tu transformes tes colonies avec le plasmide natif (= non recombinant = sans insert). Tu veux vérifier que les cellules l'ont bien intégré donc tu les étales sur une boîte contenant du LB agar et... (un antibiotique, non ).  [...]

[Divers] Un agent mutagéne: les ultraviolets ! Aide ?

Nous avions irradié une boite fraichement ensemencé (levures isolées n'ayant pas encore formé de colonies). ==. Au bout de 3 jours, nous avions des colonies roses, et d'autres blanches, alors que sur la boite controle non traitée, toutes les levures étaient roses.  [...] Cher IngDr, avec tout le respect que je te dois, les bactéries ont une photolyase, pas les Plantes. Chez les Plantes, il existe des molécules que l'on considère homologues aux photolyase bactérienne (les chryptochromes), mais il n'y a pas de photolyase.   [...]

[Biologie Cellulaire] archées, bactéries, eucaryote

il y a vraiment un gouffre niveau similitude entre les cellules archés, procaryotes, et eucaryote, après le nombre de cellules ne joue pas dans la classification.  [...] Pour certains auteurs, des cyanobactéries filamenteuses sont pluricellulaires (cellules attachées, et spécialisation avec les hétérocystes). D'autres considèrent cela plutôt comme des colonies d'unicellulaires.  [...]

[Biotechnologie] Clonage humain.

Si les cellules poussent en paquet (aggregee), les colonies ne semblent pas etre homogene (par exemple, cellule endotheliale au milieu de la colonie et cellule hematopoietique en peripherie). D'autres types cellulaires sont obtenus de facon plus empirique ou l'addition d'un milieu conditionne (dans lequel des cellules on deja pousse et secrete des facteurs caracterises et non caracterises) aux cellules ES les fait s'engager dans la voie de differenciation des cellules qui ont permi d'obtenir le milieu conditionne (ex. hepatocytes).  [...] - Et ces facteurs sécrétés par des cellules différenciées dans les milieux de culture, et rajoutés de manière empirique... font-ils l'objet d'étude spécifiques.  [...]

Plasmide et gène LacZ

Une fois les bactéries sélectionnées, il va falloir purifier les vecteurs, afin que l'ADN soit exempt de toute protéine, de tout ARN ou d'une quelconque contamination chimique. Puis, avant de commencer les expériences proprement dites, on transfecte les plasmides dans les cellules qui nous intéressent.  [...] Je pense qu'il y a une erreur parce que les bactéries non transformantes ont déjà été éliminées par l'action de l'antibiotique (Amp). Le système LacZ permet de différencier les bactéries (ou colonies) qui ont un plasmide avec l'insert (bactéries transformantes recombinantes) et celle qui ont le plasmide sans l'insert (bactéries transformantes non recombinantes) de part la couleur des colonies observées sur boîte de Pétri (si le milieu est préparé avec de l'IPTG et du XGal).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

Est-ce que j'ai une contamination une bactérie quelconque résistante ampicilinne Comment ai-je pu contaminer...sachant que je travail sous une hotte, avec des gants et bien proprement Apparement il ne s'agit ni des boites, ni du milieu de culture, ni du SOC...je ne comprend pas.  [...] non pas du tout...je ne veux pas intégrer le gène de résistance. En fait j'ai des bactéries résistantes à l'ampi qui poussent sur mes boites ainsi qu'en culture liquide et qui n'ont rien à voir avec mes plasmides ou d'autres plasmides manipulés au labo.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Déjà une chose, ça a pris plus de temps que d'habitude pour avoir des colonies. Le contrôle positif fait avec un de mes vecteurs et les cellules a donné des colonies après une nuit (normal). Pour mes plaques de transformation, j'ai du attendre 1 jour pour avoir des coloniees bien visibles.  [...] Ce qui me semble étrange, c'est que si l'ampicilline était vraiment inactif, j'aurai du obtenir beaucoup plus de colonies sur mes plaques de contrôles et de transformation (en moyenne 40 colonies obtenues). Mais j'ai vraiment du mal à comprendre comment c'est possible d'avoir les colonies blanches et de n'avoir aucun ADN plasmidique sur le gel ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Colonies de bactéries

Pour en arriver a ma question. j'ai étalé les bactéries sur des boites LB-Agar-Antibio, j'ai fait des prep sur 12 colonies. J'ai testé la bonne insertion de mon ADN dans le BAC par PCR (avec des primers designés spécialement). Le problème est que j'ai tout et n'importe quoi.  [...] Cela me donne l'impression que mes colonies sont hétérogènes et contiennent différentes populations de bactéries. Est ce donc possible qu'une colonie récupérée sur un milieu LB Agar ne soit pas pure.  [...]