• Forum - Coefficient, Partage, Protéines

[Biologie Moléculaire] Volume d'elution en chromatographie

Je suis en train d'étudier la chromatographie d'exclusion et je n'ai pas compris certains termes. Je dois calculer un coefficient de partage et, pour cela, j'ai besoin de connaître le volume mort Vo (qui est le volume compris entre les billes du gel), le volume d'élution Ve de ma protéine d'intérêt et le volume total Vc.  [...] Sachant qu'il existe une relation linéaire entre le logarithme de la masse moléculaire d'une protéine et le coefficient de partage pour différentes protéines.  [...]

Un médicament par aerosol permet un taux d'absortpion de combien dans les poumons?

@ adhalam. l'insuline est un mauvais candidat à la voie pulmonaire car c'est une protéine, donc corps à faible lipophilie et en plus trop volumineuse (53 AA). Je crois qu'il y a eu des essais de resorption au niveau de la muqueuse éthmoÏdale mais ça semble avoir fait long feu.  [...] Merci gmb, ravi de te lire ça m'a rappelé mes cours de pharmaco et la fameuse loi de Fick et le coefficient de partage, j'ai de la nostalgie pour ces années.  [...]

[Biochimie] Indice d'hydrophobicité

Je sais qu'on met l'aa en présence d'un solvant polaire, puis d'un solvant apolaire. Après on me parle de la détermination d'un coefficient de partage puis de l'indice.  [...] Tu as une phase aqueuse et une phase hydrophobe. Tu rajoutes ton acide aminée et suivant son hydrophobicité il va aller plutot dans l'un ou plutot dans l'autre. Le coefficient de partage, c'est la fraction de ta molécule qui ira dans l'une de ces deux phases.  [...]

maîtrise de la température d'HPLC

j'ai un problème sur un appareil d'HPLC manquant d'un accéssoir qui contrôle la température car je compte faire une analyse quantitative de l'acide lactique et acétique mais le protocole que je pesséde indique une température de 65°C et un autre de 45°C mais l'appareil que j'ai eu l'occasion de travailler dessus est manquant de l'accéssoir de contrôle de température alors comment faire.   [...] or si tu augmente la température, tu modifies ce coefficient de partage et donc ton temps de rétention (en général tu augmentes la proportion en phase mobile et donc tu diminues le temps de rétention).  [...]

[Biochimie] Coloration/Protéine/Concentration

Donc tu peux dire que la concentration de la protéine B est deux fois plus importante que celle de la protéine A seulement si les deux protéines ont le même nombre d'acide aminé.  [...] Je ne pense pas puisque les protéines sont différentes, leur coefficient d'absorptivité molaire est différent donc il n'y a pas de proportionnalité directe entre A et C (massique ou non).  [...]

questions en pharmacologie

6\et la dernier. esque vous pouvez m'expliquer c'est quoi le coeffecient de partage lipide-eau et son interet.  [...] 6) Le coefficient de partage lipide/eau est souvent appelé LogP. Il permet la mesure de la solubilité entre ces 2 milieux. En clair, on s'en sert pour déterminer le caractère hydrophile ou hydrophobe d'une molécule. Si le Log P est élevé alors la molécule a plus d'affinité pour les lipides que pour l'eau. Si il est faible c'est l'inverse.  [...]

[Biochimie] méthode etude macromolécules

On ne peut pas discriminer des protéines en mesurant l'absorbance à 280nm. La seule information qu'on peut en tirer, c'est la présence ou non de protéines contenant des AA aromatiques dans la solution. On peut éventuellement déterminer la concentration d'une solution contenant une seule protéine si on connaît le coefficient d'absorption de celle-ci.  [...] Pendant ma thèse, j'ai exprimé et purifié une protéine avec une forte affinité pour les ARN, donc des acides nucléiques. En début de manip, le pic d'absorption de mon échantillon se situait à 260 nm, ce qui correspond aux AN. Après 2 colonnes si je me souviens bien (une première Ni-NTA pour isoler ma protéine avec un tag histidine) puis une deuxième selon la charge, UnoQ il me semble, bref, mon pic se situait à 280 nm, ce qui témoignait de l'élimination des AN puisque ce pic d'absorption correspond aux protéines (260 VS 280 nm).  [...]

spectrophotométrie

Donc, si tu sais que ton échantillon est de la protéine pure, et que tu a le coeficient d'absorption des protéines à 280nm tu en déduis la concentration de ton échantillon en protéines (enfin, l'ordinateur la calcule pour toi, en l'occurence).  [...] En général on utilise la méthode de Bradford qui consiste à utiliser le Bleu de Coomassie G250 (se complexe aux protéines et absorbent à 595 nm) qui permet un dosage plus sensible car son coefficient d'extinction molaire est élevé.  [...]

[Biochimie] Déterminer le poids moléculaire d'une protéine après chromato

Après on a deux méthodes pour trouver sa masse moléculaire. Soit on trace une droite reliant le log(MM) des standards en fonction de leur volume d'élution et dans ce cas on trouve 85 kDa pour la LDH. Soit on passe par le Kav (défini dans notre poly comme (Ve-V0)/(Vt-V0) ce qui correspond au coefficient de partage), et dans ce cas, on trouve 123 kDa.  [...] Les résultats sont ce qu'ils sont. Le problème c'est que c'est la même valeur de volume d'élution qui me donne soit 85kDa soit 123kDa... Je ne comprend pas d'où vient une telle différence. Comme je sais que la LDH fait environ 130 kDa, je suppose que la deuxième méthode est plus précise, mais pourquoi.   [...]

[Biochimie] Pourquoi parle-t-on pour le cas des protéine du coefficient spécifique d'extinction.

au sujet de l'absorbance des proteine via la loi de beer lambert le coefficient utilisé pour les proteine est E 1% 1cm. Ce qu'on appelle le coefficient spécifique d'extinction. La concentration y est exprimée en g/ml.  [...] alors est ce juste une convention ou en fait il est absurde de parler de coefficient d'extinction molaire pour les protéine pcque elle possède un haut poid moleculaire.  [...]