• Forum - Clonage, Séquence, ADN

Limite des protéines recombinantes

Tant qu'il s'agit de cloner (une séquence d'ADN codant une protéine ou un gène entier), les facteurs limitants sont surtout la taille de la séquence. La nature de la séquence peut également influencer l'efficacité de ton clonage (mais comme on dit toujours, il en suffit d'un).  [...] Pour ce qui est de construire une protéine stable, la réponse est forcément complexe. si tu mutes de façon importante le site de dimérisation d'une protéine stable au dimère, y'a des risques. Il faut faire gaffe en général à conserver le pI et/ou conserver la structure globale.   [...]

comment cloner une enzyme extraite d'une cellule animale?

Et bien tu peux soit partir sur du séquençage par la dégradation d'Edmann (qui ne te donnera au moins le fragment N terminal, suffisant pour designer une amorce pour amplification du cDNA), soit tu as du séquençage par masse (séquençage direct et/ou avec digestion).  [...] Voilà, mais dans ces deux cas, obtenir la séquence complète peut être difficile (il faut quand même assez de produit et c'est assez cher)... d'où mon insistance pour obtenir un fragment n-ter et rétrotranscrire, puis amplifier via un polyT et ton amorce spécifique N-ter, cloner dans un plasmide et hop là (en espérant que l'ARN messager soit bien rétrotranscrit, et que la PCR se passent bien...).  [...]

[Biochimie] Important clonage

Les premiers essais de clonage reproductif sur les animaux se soldèrent par de nombreux échecs. Pourtant, la séquence nucléotidique de l'ADN du zygote est identique à celle de la cellule adulte.  [...] Ces expériences mirent donc en évidence qu'un élément différenciait l'ADN d'un zygote de l'ADN d'une cellule adulte et ce même si la séquence nucléotidique est identique.  [...]

clonage e produit de PCR

Da façon générale, cloner permet d'avoir une séquence ADN stable répliqué dans un organisme de travail et/ou d'intérêt. Il y a de nombreuses applications, dans quel cadre ce clonage est-il fait.  [...] pour moi la PCR et gel d'agarose ou sequencage suffit, mais ce que mon mettre de stage veut faire c'est un clonage apres PCR et je ne vois pas trop l'interêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr comment commencer

Question 2. Je dispose de la sequence, et apres Je connais et comprend le principe de la PCR. J'ai bien lu differents topic dont http.//forums.futura-sciences.com/bi...liser-pcr.html, mais je bloque et je me retrouve avec ma sequence sans savoir quoi en faire.  [...] Il s'agit apparement d'une expérience de clonage. Tu vas designer des primers afin d'amplifier la séquence génomique ou ADNc de ta protéine. Tu vas donc effectuer ta pcr sur le tissu qui exprime ta protéine. Une fois que tu as ta séquence amplifiée tu vas la cloner dans un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Je dois cloner un cDNA dans un vecteur pET-15b (cf pièce jointe). J'ai choisi de faire un clonage orienté, ne pouvant pas utiliser NdeI qui clive mon cDNA, j'ai choisi XhoI et BamHI. Mais comme vous le voyez sur la carte du plasmide, ces deux sites sont accolés de telle façon que lorsque XhoI clive sa séquence (C/TCGAG), celle de BamHI (G/GATCC) se trouve à l'extrémité de l'ADN, avec même pas une base avant son site.  [...] Merci pour ces propositions de criblage. Sur ce point là j'ai déjà les étapes en tête, après transformation et culture sélective je ferais une PCR en premier pour cribler les clones positifs. Et après sélection des clones et amplification, je finirais bien entendu par un séquençage de tout l'insert ainsi que de quelques bases en amont et en aval.  [...]

[Génétique] CGH hybridation génomique comparative

Pense aux duplications Si j'ai une duplication segmentale ou un nombre de copies de micro-/minisats, je vais me retrouver avec une séquence gagnée.  [...] Et donc il ne peut pas y avoir de nouvelles sequence qui apparait ce sera toujours la prolongation d'un satellite ou le clonage d'une sequence.  [...]

[Biotechnologie] Race PCR

Anchor primer c'est plutôt primer d'ancrage, c'est le primer qui va se fixer sur la queue polydA. Cette queue est créée avec la TdT afin d'avoir une séquence connue en 5', en amont de la séquence de l'ADNc, pour pouvoir choisir une amorce spécifique et ainsi ne pas perdre la partie 5' de l'ADNc lors de la PCR qui suit.  [...] A partir la séquence 5' de l'ADNc, on peut alors designer des primers spécifiques et cloner le gène concerné. Là c'est vraiment une finalité concrète. D'ailleurs en cours j'avais appris les innombrables techniques de RACE (car y en a pas qu'une) dans le cadre de l'apprentissage du clonage moléculaire.  [...]

[Microbiologie] clonage dans un plasmide p gex d'une séquence de génome de mycoplasma meleagridis

[Microbiologie] clonage dans un plasmide p gex d'une séquence de génome de mycoplasma meleagridis.  [...] On peut quand même dire que la première chose à faire devant des plasmides dont le contenu est vaguement connu, voir douteux, est de les séquencer pour déterminer au nucléotide près ce qu'ils contiennent. En gros, reconstituer la documentation qui vous fait défaut.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage pCR sequnsage

je ne sais pas quand est ce on utilise les enzymes de restrictions sur la totalité de l adn pour obtnir des fragements quand va cloner dans un vcteur (bacteri par exmpl) et quand est ce que on cherche un seul fragements d adn pour le clonr et comment on procede pour le chrcher.  [...] on dit qu on utilise la PCR dans le clonag dans qu el niveau et on multiplie quoi on sit que le promotur du vecteur va faire la multiplication t l 'expression d tous l adn rcombinant donc a quoi sert la PCR et l sequensage quand st que on l utilise avant ou aprs clonage.  [...]