• Forum - Clonage, Fragment, Sens

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.  [...]

génie génétique

On peut choisir de fabriquer un fragment dont chaque extrémité présente un site de restriction différents ET qui sont aussi sur le plasmide, comme ça le fragment ne pourra s'insérer que dans un sens qui est celui sur le plasmide de clonage. ok.  [...] Pour la question initiale, on peut en discuter en privé si tu veux. en gros la stratégie est de faire en sorte que le fragment de restriction soit différent sur ces deux bords pour qu'il s'insère de façon complémentaire dans le vecteur (comme un Tetris.).  [...]

Comment orienter un fragment d'adn dans un vecteur

Donc pour cela je suppose qu'on peut utiliser des primers avec une partie 5' non complémentaire qui permet de générer un site de restriction différent selon le côté du fragment ce qui permet d'introduire le fragment dans le bon sens en utilisant les 2 sites différents.  [...] L'utilisation de sites de restriction est le seul moyen pour faire cela. Une autre solution est de ne pas orienter le fragment, et une fois le clonage fait tester les plasmides pour trouver ceux qui auront un insert dans le bon sens. Apres tout tu as 50% de chance que ton insert soit dans la bonne orientation.  [...]

[Divers] clonage et maths

Je veux bien t'accorder que le clonage d'un végétal ou celui d'un fragment d'ADN soit quelque chose d'intéressant à montrer aux camarades du lycée (pff, je suis vieille...), mais est-ce que tu crois que ça a un lien avec ton sujet Ou tu veux montrer quoi Qu'on peut cloner un végétal relativement facilement, mais pas un humain... Dans ce cas, faudrait comparer les deux.  [...] Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage petit fragment d'ADN

après criblage j'obtiens des clones mais une PCR à l'aide d'amorces spécifiques de mon fragment montre qu'il n'y a pas d'insert dans le plasmide.  [...] Sinon une purification sur gel après la digestion peut permettre de savoir si la digestion a bien eu lieue (mettre le produit non digéré et digéré sur un grand gel d'agarose 2% que tu fait migrer sur la nuit a ~ 60 V ça permet d'avoir une assez bonne résolution pour les fragments de cette taille).  [...]

réplication de l'ADN

alors si je comprends bien les fragments d'okazaki ne sont utilisé que sur le brin nouvellement synthétiséet c'est la que l'ADN polymérase doit travailler par piqure en points arriere pour rester ds le bon sens.  [...] Il est donc possible de synthétiser l'un des brins en un seul morceau puisque les brins se séparent dans le sens de sa synthèse. En revanche le brin retardé est synthétisé dans l'autre sens, c'est à dire vers le lieu d'ouverture de l'oeil de réplication, lorsque les brins matrices sont séparés, de nouvelles origines de réplication apparaissent et un fragment d'Okasaki peut alors commencer à être synthétisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comprendre les cartes des plasmides

Il me semble que ce sens déterminer le sens de transcription du gène... aussi, lorsque l'on insert un fragment, le sens aura une importance ( selon l'insert )/.  [...] L'arn polymerase transcrit dans le sens 5'. 3' toujour dans le brin 3'. 5' mais cela va dependre du sens sinon pour la lecture des deux cotés c'est plutot un fragement de klenow qui est une adn polymerase I avec son activité endonucléasique en moins je crois.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression.  [...] Vecteur de clonage. Destiné à isoler physiquement un fragment d'ADN et à amplifier le nombre.  [...]

[Génétique] clonage

est ce que on peut changer gène de résistance par fragment d'adn dans le clonage.  [...] il va falloir être un peu plus precis... ca n'a pas de sens en l'état.  [...]

Clonage dans un vecteur

bonjour. je voudrais savoir comment peut-on augmenter l'efficacité du clonage des fragment d'ADN d souris dans les vecteurs.  [...] On pourrait presque dire que chaque clonage est différent. il y a pas mal de paramètres à prendre en compte. taille de l'insert, taille du plasmide, technique de transfo, conditions de ligation (ratio insert/vecteur, température, durée, Unités de ligase, bouts francs, cohésifs), etc. etc.etc.  [...]