• Forum - Clonage, ADN, Digestion

[Biologie Moléculaire] Clonage

J'ai besoin d'aide pour un clonage. Je dois cloner un fragment d'ADN génomique bactérien dans un plasmide. La stratégie choisie est de linéariser le vecteur par digestion enzymatique, de le purifier sur gel, de le déphosphoryler et de faire la ligation avec l'insert.  [...] Et je bloque à cette étape. j'obtiens autant de clones pour mes bactéries transformées par le vecteur linéarisé que par celles transformées par le plasmide natif. J'en ai donc déduit une mauvaise digestion. Or, j'utilise les enzymes Fast Digest de chez Fermentas pour une digestion o/n.  [...]

Clonage par PCR

J'ai une petite question... j'aimerais savoir a quoi correspond exactement l'expression clonage par PCR. Est-ce quand on ajoute en 5' de l'amorce la sequence specifique d'un site de restriction, ce qui permet ensuite de liger le produit de pcr dans un vecteur contenant le meme site de restriction (en resume) Ou bien est-ce autre chose.  [...] Je pense qu'il s'agit tout simplement d'un clonage à partir d'ADN que tu as amplifié par PCR q'il s'agisse d'une ligation après digestion enzymatique ou autre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

J'ai une question en ce qui concerne le clonage avec un plasmide, j'ai cru comprendre quelques trucs mais j'ai peur de m'embrouiller avec la PCR en ce qui concerne les enzymes de restriction.  [...] pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et Clonage

s.v.p j'aimerai bien comprendre la différence entre la PCR et le clonage autrement dit est-ce-que lors d'une amplification de l'ADN le choix entre une PCR et le clonage se fait d'une manière aléatoire ou bien y'a des règles a suivre.  [...] La PCR permet d'amplifier une portion d'un génome d'ADN selon les amorces que tu choisis. Le clonage consiste à insérer un morceau de gène à l'intérieur d'un ADN.. (souvent dans celui d'E.coli via un plasmide, dit vecteur).  [...]

[Génétique] Génie Génétique !!!

Pourquoi ne pas essayer d'expliquer le principe du clonage J'entend le clonage moléculaire (multiplication à l'identique des fragments d'ADN).  [...] Sinon, tu peux expliquer ce qu'est une PCR en la présentant comme la technique permettant d'amplifier le nombre de molécules d'ADN, très utilisée en criminologie (sujet à la mode).  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr sur colonies clonage

Si tu doutes vraiment de la PCR colonies dans tes conditions/enzymes/clonage, tu peux toujours tester sur quelques minipreps, mais je n'ai jamais eu le cas.  [...] J'ai utilisé la kit Qiagen avec succès pour extraire mon produit de PCR du gel d'électrophorèse. En revanche, je ne connais pas les autres kits. Je n'ai pas fait de clonage depuis maintenant deux à 3 ans, mais dans mon souvenir, je ne faisais pas de purification après la digestion, mais la ligation directement.  [...]

[Biologie Cellulaire] ADN mitochondrial et clonage

Pierre Roubertoux et son équipe ont réussi à démontrer l'influence de l'ADN mitochondrial sur le comportement de souris. Or, lors d'un clonage par transfert de noyau, 2 types d'ADN d'origine différentes sont en présence (l'ADN mitochondrial de la cellule receveuse et l'ADN nucléaire du noyau transplanté) de fait un clone n'est pas la copie conforme (même génétique) d'un original.  [...] Deux clones sont génétiquement identique si on occulte l'ADN mito sa c'est claire, c'est la définition de clone par contre il est très probable comme c'est le cas lors de clonages d'animaux que deux clones ne se ressemble pas. Celà est dû à des modifications épigénétique du génome qui dépendent en parti de l'environnement et de divers stimulis.  [...]

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

Ma question est la suivante. la selection à la base de la tetracycline ne va-t-elle pas tuer les bactéries ayant incorporé le plasmide qui porte l'ADN dont on a besoin.  [...] Si c'est bien ça. tu as raison, en clonant ton gène dans le gène TetR, tu l'innactives donc, si tu mets les bactéries en présence de tétracycline, tu vas les tuer et tu n'auras pas ton clonage.  [...]

[Biologie Moléculaire] les enzymes

Bon la taq fonctione a de hautes temperatures pendant un certain temp ce qui la rend utile pour un clonage d'adn avec moins d'inconveignants et elle vien d'une bacterie vvant dans des milieu a haute tempeature.  [...] Bon la taq fonctione a de hautes temperatures pendant un certain temp ce qui la rend utile pour un clonage d'adn avec moins d'inconveignants.  [...]

Aide pour l'écriture d'un roman : biologie et chimie végétale

si c'est ca alors tu peux imaginer injecter une substance contenant des ARNm (ou un virus pouvant retrotranscrire une partie ADN dans le génome de la plante) et que cette séquence code pour une enzyme responsable de la synthèse des antocyanes, les ARN vont être transcrits par les cellules de la plante (ou dans le cas du virus, il va infecter les cellules et integrer sa séquence dans l' ADN de la plante qui va par la  [...] son génome, en ARNm, ce deuxieme procédé est plus stable dans le temps mais directement injecter des ARNm fonctionne aussi, seulement c'est une question de jours ou de semaines, apres quoi les ARNm sont dégradés et comme elle ne peut pas en fabriquer alors dans le premier cas la couleur s'estompera).  [...] le clonage n'est pas parfait, encore moins sur des fossiles, ce qui n'a pas empêché de créer un quatrième Jurassic parc (jurassic world) se basant sur des fondements scientifiques, la conservation des insectes dans de l'ambre, et la conservation du génome en milieu non soumis aux digestions bactériennes et environnemental, bien que concrètement cette idée pose problème car meme dans les insectes fossilisés on ne retrouve pas d' ADN totalement intact ou suffisant.  [...]