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[Biologie Moléculaire] souris sv129

je souhaiterai savoir si les cellules de souris sv129 possedent l'antigene t de sv40 j'ai en effet vu lors de mon stage qu'il était possible de transfecter des.  [...] cellules eucaryotes avec un plasmide bacterien qui comporte le sequence sv40 ORI. jignorait jusque là qu un plasmide pouvait s'exprimer dans des cellules eucaryotes. je me demandais donc si c'etait pour cette raison (pour pouvoir faire des transfections)que les souris utilisées étaient issues de croisement entre souris sv129 et B6.  [...]

transgenese

L'ADN nu contenant la séquence thérapeutique est injecté sous forme de plasmide bactérien dans le tissu cible. Il est ensuite intégré dans les cellules par des mécanismes encore inconnus.  [...] De l'ADN plasmidique est injecté dans le tissus cible (par exemple le muscle de la patte d'une souris) puis on applique deux plaques d'acier contre la patte qui servent ainsi d'électrode, on envoie ensuite des impulsions électriques répétées, en essayant de trouver les fréquences et intensité correspondant au meilleur transfert.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Pour faire une selection des cellules transfectées, il faut par exemple que le plasmide possède un gène de résistance à un antibiotique (puromycine par exemple), ainsi seules les cellules transfectées vont survivre pendant une culture en présence de l'antibiotique.  [...] On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion. la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dominant négatif

bonjour tout le monde, est ce que quelqu'un peut m'expliquer comment ça marche concrètement une expérience de dominant négatif j'ai ma lignée cellulaire ou je veux éteindre ma protéine, je les transfecte à l'aide d'un plasmide contenant la séquence mutée et je la trouve ou cette séquence et le plasmide ça s'achète ma question est peut être bête mais je n'ai jamais fais ça alors j'ai besoin d'éclaircicements, merci.  [...] Sinon pour clarification, pour 'éteindre' une protéine comme tu le dis, des siRNA permette de supprimer la protéine complétement. Un dominant négatif ne fait que bloquer une fonction de la protéine, tout en la maintenant physiquement présente dans la cellule.  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

Parce que imaginons qu'on coupe une séquence ( TAAGCG ) du plasmide on prendra une séquence de l'ADN étranger mais qui a les même bases azotées pour qu'elle soit complémentaire avec l'autre brin du plasmide parce que si on prendre d'autres bases, il n'y aura pas complémentarité ( G avec C, T avec A ).  [...] Il n'y a pas d'incohérence puisque le gène recombinant est obtenu grâce à la même enzyme de restriction que celle qui sert à ouvrir le plasmide. La séquence ADN d'intérêt s'insère donc dans celle du plasmide par complémentarité de ses extrémités avec celles du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Attention, l'extinction par le shRNA n'est stable que s'il est intégré dans le génome de la cellule hôte. Lors de la transfection de shRNAs, leur séquence est présente dans un plasmide. Leur expression est donc transitoire s'il n'y a pas intégration du plasmide dans le génome.  [...] Bien sûr mais la pression de sélection ne permet que de sélectionner les plasmides intégrés et les plasmides épisomaux répliqués. Dans ce dernier cas, il leur faut une origine de réplication exploitable par la cellule transfectée, comme par exemple un plasmide contenant l'origine de SV40 avec les cellules COS-7 qui possèdent l'antigène T nécessaire pour répliquer les plasmides contenant cette origine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'ai la séquence complète du plasmide, mais je ne sais pas quelle est la séquence du promoteur bla (oui c'est celui-ci qui m'intéresse). Je sais juste où débute le codon start du gène bla.  [...] Vous avez la séquence du plasmide. J'imagine que sur la carte vous devez avoir les limites de votre cassette ampi (promoteur et séquence codante). Y a qu'a compter pour trouver la séquence de votre promoteur sur votre plasmide.  [...]

Séquençage de l'ADN

S'il s'agit bien du plasmide oui elle s'hybride sur un seul des deux mais ensuite ce brin de plasmide (un des deux) peut fixer les deux brins à séquencer et du coup on séquencera des fois l'un des fois l'autre, c'est ce que je veux dire. Et sans savoir lequel on séquence.  [...] S'il est obtenu par PCR, ou par digestion enzymatique (sauf blunt) par exemple, on sait dans quel sens il sera inséré dans le plasmide. Si on fait du séquençage total (comme WGS par ex), on s'en fout un peu puisqu'il y aura, après reconstitution, des séquences codantes sur les deux brins.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Donc d'aprés toi si avec le plasmide vide il y a une bande qui correspond à la bande inattendue c'est que la pCR a amplifié une séquence sur le plasmide.  [...] Sinon le but de l'expérience est purement de l'apprentissege technique pour qu'on soit capable de faire un southern.. A partir d'un plasmide ou d'ADNgénomique on fabrique les sondes..(Dans le reste du TP on transfecte des cellules avec PPAR, RXR un plasmide raporteur qui contient les séquences de liaison au PPAR, ou avec une séquence que l'on veut tester quant à la fixation de PPAR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Maintenant ça vient d'un préjugé dû à une première expérience pénible avec un pET. C'est vrai que le souci venait du saligot qui m'avait refourgué le plasmide qui lui était réellement véreux (d'ailleurs je dois aussi à cet olibrius une souris et un anticorps pourri.  [...] Y-a-t-il un moyen que je transfecte ca dans des cellules eucaryotyes Je pense que je connais la reponse mais je tente... Ou bien il me faudra sous-cloner ma sequence dans un autre plasmide genre pcDNA3 classique par exemple, n'est-ce pas (si j'arrive a connaitre les enzymes de restriction pour ce faire...).  [...]