• Forum - Cellules, Paraformaldéhyde, étapes

[Biologie Cellulaire] monocyte et immunofluorescence

Bref, mais lorsqu'on veut faire de l'immunofluorescence indirect sur des monocytes par exemple (qui sont libres) comment procède-t-on.   [...] Pour les cellules non adhérentes, on utilise la méthode du cytospin qui consiste à centrifuger les cellules avec au fond une lamelle. On centrifuge à 7000g environ pendant 10 minutes, avec la force centrifuge les cellules se plaquent sur la lamelle, on peut ainsi fixer ces cellules au paraformaldehyde puis réaliser les étapes suivantes d'une immunofluorescence.  [...]

[Biologie Cellulaire] Différence entre formaldéhyde et paraformaldéhyde pour la fixation de cellule ?

Différence entre formaldéhyde et paraformaldéhyde pour la fixation de cellule.  [...] J'aimerai savoir quelles sont les différences fondamentales entre le formaldéhyde et le paraformaldéhyde lors de la fixation de cellules.  [...]

fixation des cellules

Je voudrais savoir ce qui se passe dans les cellules du point de vue chimique lors de leur fixation avec du PFA (paraformaldéhyde) et avec du méthanol.  [...] La méthode de fixation par la formaldéhyde va créer des ponts entre les protéines ce qui permet une conservation de la localisation. De plus les lipides ne sont pas solubilisés. C'est pour cette raison qu'il faut perméabiliser tes membranes avant de faire une manip d'immuno par exempl.   [...]

[Biologie Cellulaire] fixation d'immunomarquage

Bonjour, on a fait des lames de cytospeen de cellules épithéliales du limbe qu'on a congelé et on va faire un marquage à la vimentine et e5. On voudrait savoir quel est le meilleur moyen pour fixer les cellules. On possède du paraformaldéhyde, du méthanol et du dako faramount et surement d'autres choses.  [...] Par défaut, la plupart des gens utilisent le paraformadéhyde (PFA) pour fixer les cellules. Par contre tu as parlé de fixation après immunomarquage...habituellemen t on fait l'inverse on fixe puis on marque. Sinon, je pense que l'optimisation du fixateur serait à faire dans le cas où il y a des problèmes de marquage.  [...]

[Biologie Cellulaire] fixation au paraformaldéhyde

Voilà, je dois fixer au paraformaldéhyde 4% des cellules adhérentes sur lamelles afin de faire par la suite de l'immunofluorescence, mon problème est que je ne pourrai pas faire le marquage à la suite de la fixation.  [...] Même réponse que Biocell. J'ajouterai juste qu'en les gardant comme ça dans le PBS, j'ai observé que les cellules ont tendance à être plus perméables (étape de perméabilisation à adapter).  [...]

[Biologie Cellulaire] Le HGF décolle mes cellules ?

De ce que je lis du paraformaldéhyde dans Wikipédia, c'est carcinogène plutôt que cytotoxique. La DL50 est raisonnable. J'ai un peu de mal avec l'appauvrissement en sérum bovin foetal - n'étant pas laborantine, l'intérêt m'échappe un peu. Peut-être que cela incite les cellules à migrer plutôt que se multiplier (je suppose).  [...] Vous parlez de la DL50 orale sur rats Je ne pense pas que ça soit pareil sur des cellules et c'est surtout en inhalation que c'est toxique, du coup je ne sais pas trop comment utiliser cette info.  [...]

[Biologie Cellulaire] Perméabilisation cellulaire

La manip fait intervenir du paraformaldéhyde pour fixer les cellules, puis du Triton X pour perméabiliser les membranes. On ajoute ensuite les anticorps un à un... etc.  [...] Le PFA contient 2 fonctions alcool et n'est donc pas susceptible de former des bases de Schiff (à moins qu'il ne puisse se déprotonner dans du PBS ). De toute façon, j'imagine que ma solution est constituée de formaldéhyde et non de PFA.   [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire - Page 2

Ma deuxième question porte sur le double marquage PI et Ki67 ou PCNA. L'aviez vous déjà fait si oui, faut il forcément faire une perméabilisation au Paraformaldéhyde sachant que mes cellules vont être ou ont été fixées à l'alcool Si vous avez des conseils pratiques, je suis bien disposé à les recevoir.  [...] Le PI se lie aux cellules qui ont perdu leur integrité, il se lie au noyau des cellules, avant de mettre le PI, on met le tampon de citrate qui casse tout, il n'y a que les noyaux qui restent. Pourquoi fixer les cellules.  [...]

Immunohisto

Le premier, lors de la fixation et de l'inclusion dans la paraffine est l'incubation dans le PFD (Paraformaldéhyde) quelqu'un sait-il à quoi sert cette étape exactement.  [...] Le paraformaldehyde (PFA) sert a fixer ton echantillon. C'est un fixateur chimique, un agent pontant, qui va creer des liens covalents entre les proteines en particulier entre les amines libres. L'interet est multiple. 1-l'echantillon, le tissu, reste dans l'etat ou tu l'a fixe l'histologie et la cytologie sont conserves, 2-il n'y a plus degradation des elements cellulaires donc les antigenes a detectes sont preserves, 3-le tissus peut etre plus facile a couper si tu le fixe avant la coupe.  [...]

[Immunologie] utilisation du paraformaldéhyde

La première façon est de partir de paraformaldéhyde en poudre et de la chauffer en PBs pour sa dissolution. sur le plan sécurité, ce prodédé est très moyen car la poudre est très volatile et le produit très cancérigène produit des vapeurs (or c'est un cancérigène reconnu), et la solution obtenue n'est pas stable dans le temps.  [...] Il existe en effet du paraformaldehyde en solution sans methanol, vendu sous forme d'ampoules (à 20% je crois bien), à diluer. Ce qui évite la pesée et dissolution du PAF en poudre.  [...]