• Forum - Carte, Séquence, Vecteur

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction du plasmide pAK400

Je me demandais si l'un d'entre vous ici aurait ça sous la main ou alors saurait où je peux trouver cette précieuse carte ou alors la séquence du vecteur. Et si tel était le cas s'il pouvait me la donner ce qui m'aiderait énormément.  [...] J'ai donc envoyer un mail à l'un de ces généreux donateurs pour lui demander ce que je cherche, si jamais il avait encore la carte et la sequence du vecteur sous la main.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Je dois cloner un cDNA dans un vecteur pET-15b (cf pièce jointe). J'ai choisi de faire un clonage orienté, ne pouvant pas utiliser NdeI qui clive mon cDNA, j'ai choisi XhoI et BamHI. Mais comme vous le voyez sur la carte du plasmide, ces deux sites sont accolés de telle façon que lorsque XhoI clive sa séquence (C/TCGAG), celle de BamHI (G/GATCC) se trouve à l'extrémité de l'ADN, avec même pas une base avant son site.  [...] Prendre un des oligos que l'on a introduit dans le vecteur pour faire du colonie lift (une sorte de southern blot in situ). Ca marche assez bien mais en général on le fait quand on a du mal à trouver des clones recombinants. C'est un peu l'artillerie lourde pour pas grand chose.  [...]

clonage insert

L'insert fait 2825bp il est dans un vecteur. Tu dois trouve la carte de se vecteur si tu veux pouvoir avoir la taille quand on le linéarise.  [...] Et concernant la taille du vecteur, l'exercice est sans carte, n'est il pas possible de trouver cette taille sans s'aider de la carte.  [...]

[Biochimie] Mécanisme de réplication de l'ADN

la fourche de repliction est initiee pr des proteines d'initiation qui se fixent sur une sequence particuliaire ri v..l'adn helicase se lie ensuite a ce complex et ouvre la molecule d'adn.  [...] surl'un,la fourche avance de 3'...5' et la chaine complementaire peut etre synthetisee directement en suivent la progression de la fourche.c'est la synthese du brin precose sur l'autre brin,par contre,il faut ttendre que l fourhe se soit ouverte pour mettre la synthese en direction opposee a la progression de l'helicase.   [...]

[Biochimie] Gateway technology

So here is my question. I want to use the gateway cloning technology. I have received from another lab an entry vector and a destination vector. To build my entry vector containing my sequence of interest, could I use the entry vector I received and put directly my PCR product in it Or I have to make first a BP reaction with a donor vector to obtain a new entry with my sequence of interest.  [...] Je tombe sur cette discussion 3 ans après mais la je suis dans la meme situation. Avez vous pu réussir votre clonage En effet je dispose d'un système gateway et j'ai des fragments pcr que j'ai envie d'insérer dans mon vecteur d'entrée pENTR1A, mais la carte de ce vecteur est un peu ambigue pour moi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

J ai vu que lorsque l'on enregistre une séquence on a des options pour entrer les extrémités cohésives, est ce champ là qu'il faut remplir pour obtenir le vecteur sous forme circulaire Auquel cas je n'y suis pas arrivée.  [...] J'utilise serial cloner (merci serialbasics) mais je ne trouve pas comment changer les couleurs des séquences soit les lettres ou surlignage dans la partie séquence soit les flèches sur le vecteur circulaire dans graph map. Par contre j'ai trouvé dans features les couleurs pour les annotations des features dans grap map.  [...]

[Génétique] Carte génique et carte physique

Ces marqueurs sont soit des gènes au sein desquels il peut y avoir une mutation ou soit une séquence polymorphe quelconque (RFLP, RAPD, SSLP, SNP). =. on a pu donc cartographier une série de marqueurs et les disposer sur une carte (en fonction de la distance trouvée entre eux en cM sachant que 1 cM = 1% de phenotype recombinant).  [...] Comme vous pouvez le voir tout est assez confus pour de ce qui est de la cartographie d'un gène. C'est surtout lorsqu'on parle de carte physique et pour trouver la séquence du gène que je ne comprends pas trop bien. La seule chose que j'ai plus ou moins bien compris c'est la carte génique. Si qqn pourrait m'aider ca serait bien gentil.  [...]

[Biologie Moléculaire] identification d'un gène

Non, car ici c'est le côté 5' du gène. Et même si le fournisseur a ajouté une queue poly A au 5' des gènes pour l'obtention de l'ADNc double brin, le séquençage doit voir directement un polõA) tract, et non un poly(T) (j'ai fais un dessin pour vérifier.  [...] - le fait que le produit est long et la séquence est courte peut être expliqué par un mécanisme quelconque... (mais lequel une polymérisation des fragments PCR la bande de 1000 bases que je vois est non spécifique, et je séquence une autre bande 150 bases invisible sur gel ).  [...]

[Biochimie] Clonage après purification sur gel

J'ai donc essayé de digéré mon plasmide ainsi que ma k7 de résistance (1 enzyme pour le vecteur mais 2 sites différents et 3 pour la k7 de resistance). Ce protocole n'a fonctionné qu'une fois. Depuis j'ai toujours des vecteurs ayant échappés à la quadruple digestion.  [...] Cela ne règlera pas ton problème, mais ça pourrait contribuer à le résoudre. Je n'ai pas compris grand chose à ta stratégie de clonage, surtout parce-que tu n'as joint aucun schéma (carte du vecteur par exemple).  [...]

[Biologie Moléculaire] changement de gene de resistance dans pCDNA3

Je travaille actuellement avec le plasmide pCDNA3 qui contient le gene de resitance a l'ampicilline. La sequence de ce gene est reverse complement dans la sequence du plasmide. Je souhaite remplacer ce gene par le celui de resistance a la kanamycine. Q. Dois-je inserer la sequence reverse complement ou ca n'a pas d'importance.  [...] Je ne comprends pas trop ta question... j'imagine que tu veux dire que la séquence codante est sur le brin inverse d'après la carte plasmidique de Invitrogen (lien).  [...]