• Forum - Carte, Restriction, Fragments, Digestion

Carte de restriction de Pcr-GAI

Bon apparemment on dispose de BamHI donc dans ce cas on peut libérer le 5' GAI en utilisant HindIII et BamHI et ensuite le faire digérer séparément par XhoI et BglII si on obtient deux fragments par digestion, on a les deux sites de restriction sur le 5' GAI (donc dépend d'un coup de chance) sinon il faut (pour améliorer la carte de restriction) obligatoirement isoler le 3'GAI avec EcoRI et HindIII et le mettre en contact avec l'enzyme dont on cherche encore le site de restriction.  [...] J'ai peut être oublié de préciser que je n'ai jamais établi de carte de restriction ^^'. En fait je ne vois pas du tout comment placer les sites de restriction rien qu'en regardant une électrophorèse...Car finalement on aura des fragments de différentes tailles à mettre bout à bout mais dans quel sens.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Maintenant la méthode. elle est basée sur la taille des fragments de restriction, c'est-à-dire sur la taille des morceaux d'ADN obtenus après digestion.  [...] ps. je te conseillerai plutot de faire une carte de restriction linéaire afin de bien juxtaposer les fragments qui ont été coupés ou non dans la double digestion.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] Si oui j'ai un petit problème,avec notre électrophorèse on a ajouter un ladder ( une gamme étalon pour visualiser la taille de nos fragments ) si la carte de restriction est bien donné par l'électro je visualise que mon deuxième site de coupure Xho1 se trouve entre 800 et 1000 paires de bases.  [...]

Comment calculer la taille des fragments sur une carte de restriction?

il y a quand meme un fragment à la migration qui correspond à la taille du plasmide entier linéarisé (et en biologie moléculaire, les simples digestions donnent des renseignements importants) il faut donc quand même dire qu'il y a un fragment de 4,7.  [...] En fait le plus simple c'est de commencer à déterminer le nombre de sites de coupure de chaque enzyme en fonction du nombre de fragments. Ensuite, avec les doubles digestion faites une carte comme vous avez fait.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

En fait, on a fait notre electrophorese sur plusieurs especes de E.coli, HRPN PGAG PCK3 et PLTR avec ECOR1 et HINDIII, une autre chose que je n'ai pas comprise, c'est. Est ce que c'est enzymes de restriction vont séparer les plasmides avec le même nombre de fragments A priori non.  [...] La carte circulaire comme tu dis (= la carte de restriction) se fait après l'électrophorèse. Tu ne peux pas prédire le nombre de fragments que tu auras (à part si tu connais la séquence complète de ton plasmide).  [...]

enzyme de restriction BamH1

En labo, je fais digérer un plasmide pcDNA3.1(+)par l'enzyme de restriction BanH1,  [...] Oui en principe la position du mot BamHI sur une carte de restriction indique le lien où BamHI est censée coupée. Possible que l'on vous ait parlé d'EcoRI dans le cadre d'une double digestion EcoRI ET BamHI.  [...]

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

Je n'arrive pas a faire ma carte de restriction, je ne comprend pas cmt je peux obtenir 1 seule bande pour la double digestion. J'ai envisagé de hypothèses.  [...] Sinon cela peut-être du à l'activité star de bamHI qui est capable de reconnaitre les sites de EcoRI mais dans ce cas là, on en revient toujours au même, pour la double digestion, j'aurais dut obtenir les mêmes fragments que pour ceux de ecoRI.  [...]

Carte de restriction ( génétique)

Un ADN est digéré par trois enzymes (EcoRI, PstI, SmaI) afin de réaliser une carte de restriction. Après électrophorèse sur gel d'agarose, les résultats obtenus sont les suivants*(taille des fragments observés).  [...] Déterminer la carte de restriction de cet ADN en expliquant clairement et précisément vos choix. Chacun des trois enzymes utilisés reconnaît une séquence spécifique et distincte des deux autres.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Pour ta dernière question, il faut bien sur faire sauter le stop de la stathmine. Il y a plusieurs options. soit tu as un site de restriction bien placé, soit tu places la GFP après et tu modifie le codon stop en mutagénèse dirigée. Truc capital. les ADN codants pour ces deux protéines doivent être insérées dans le vecteur EN PHASE.  [...] Tout a fait, si tu as une carte de restriction tu peux couper a la base pres. Il faut juste avoir un site bien placé. Comme ça tu peux supprimer la fin de ton ADNc et le rabouter a ton autre gène, sous réserve de sites de restrictions bien placés sur l'un et l'autre des fragments et qui permettent un assemblage en phase.  [...]

[Biochimie] Calculer la taille d'un fragment dans une carte de restriction

Dans un exercice, on nous demande de calculer la taille des fragments d'adn produit de la digestion en utilisant les fragment d'adn marqueurs de taille.  [...] en fait non, la taille des fragments est déjà indiqué sur la figure 3. Là en fait, la difficulté de l'exercice est de coupler l'info de la restriction de ton plasmide et insert par l'un puis par l'autre, et de deviner ce qu'il va se passer une fois que je ferai les deux en même temps.  [...]