• Forum - But, Fragments, ADN, Restriction

Extraction d'ADN

Cet ADN obtenu ainsi est suffisamment pur pour l'analyse de restriction et le clonage des fragments d'ADNmt.  [...] Je crois me souvenir qu'une centrifugation particulière permet d'isoler les mitochondries (elle est relativement puissante si mes souvenirs sont exactes. Peut être peux tu commencer par ca avant de faire ton extraction.   [...]

[Divers] Dnathèque

Qu'entends tu par DNAthéque Un congélateur où tu stockerais des fragments d'ADN génomique Dans quel but.  [...] Perso, j'ai pas de DNAthèque mais un souchier dans lequel les constructions sont expliquées. Dans le même dossier, on a les fichiers des séquences de ces constructions (DNA strider) et des amorces. Pour les ADN dont on trouve les séquences dans la GenBank, on précise le numéro d'accès.  [...]

[Biologie Moléculaire] Epidémie de diarrhées (tp)

Bonjour, je suis en L1 biologie et j'ai des questions à propos d'un test moléculaire fait en cours sur les souches des bactéries causant la diarrhée. Nous avons vu que la plupart du temps elle est due aux gènes invasive et adhésine. Nous avons réalisé une électrophorèse des plasmides des malades, nous savons qu'il y a deux souches différentes de bactéries causant la diarrhée et notre but est de savoir si la diarrhée étudiée est causée par l'invasine et l'adhésine en comparant la tailles des fragments d ADN qui ont migré avec la carte de restriction de l'invasine et adhésine.  [...] J'ai tracé le graphe distance parcourue en fonction de la taille des fragments pour avoir une droite étalon mais je n'arriva pas à savoir s'il y a des similitude entre les fragments d'adhésine et invasine et les plaide étudiés donc à savoir si ces deux gènes sont les responsables de l'épidémie.  [...]

Random priming

Ok, mais quand bien même, comment sais-t-on que nos amorces vont s'hybrider spécifiquement sur le gène que l'on cherche à sélectionner et pas ailleurs Le but étant, si j'ai bien compris, d'utiliser d'utiliser des marqueurs radioactifs ou fluorescents pour distinguer le gène d'intérêt des autres fragments d'ADN.  [...] Est-ce que les techniques de random priming peuvent ou non être utilisées à des fins de sélection d'un gène d'intérêt à partir d'une banque d'ADN génomique (en pratique j'entends, car n'étant pas encore dans le milieu de la recherche, je ne sais pas quelles techniques sont les plus utilisées et pour quoi parmi toutes celles vues en cours).  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

J'aimerai comprendre quelle est l'utilité de la PCR (Polymerisation Chain Reaction)... Je comprend bien qu'on va pouvoir avoir des millions de copies d'une même séquence d'ADN... Et après.  [...] Sinon, la PCR peut être une étape nécessaire au diagnostic et le but est bien d'obtenir un grand nombre de fragments d'ADN pour ensuite le séquencer par exemple, et là c'est le séquençage qui répond à ta question, pas la PCR elle-même qui n'a été qu'un outil d'amplification.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Le plus bas que j'ai fait c'est 0.4% d'agarose et ça pouvait encore allé, d'où ma remarque sur le 0.2%...C'est vrai que ça fait peu. Déjà si tu fais un 0.6% ce sera mieux en effet. Mais ton but n'est apparemment pas de séparer des fragments d'ADN génomique, c'est plutôt pour voir si ta purif a bien marché, je me trompe Dans ce cas l'important est que ton ADN génomique rentre dans le gel pour vérifier la netteté de la bande, afin de voir s'il n'y a pas de dégradation qui causerait un smear en-dessous.  [...] C'est inutile de diminuer encore la concentration en agarose dans le gel. Les fragments d'ADN génomique sont simplement trop gros pour être résolus dans un gel d'agarose en électrophorèse classique. Mais ce n'est pas ce que vous souhaitez faire, donc pas de souci à avoir.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

A partir de ma connaissance. un gène est une séquence d'ADN entre une région promotrice et une codant STOP, ce gène est composé de nucléotides, ces derniers sont des constituants de base de l'ADN, celui-ci est bicaténaire ( double brin). Donc pour avoir une protéine il faut passer de l'ADN au protéine.  [...] J'ai compris le principe de la lyse cellulaire, mais je n'arrive pas à bien cerner l'élimination des protéines. En gros, après la lyse des cellules, on obtient une solution visqueuse formée de longs filaments d'ADN. Mais j'ai vu qu'ensuite, par l'ajout de phénol, on obtenait une solution biphase aqueuse/organique.  [...]

Expériences en génétique…

L'idée c'est plutot de purifier le plasmide dans un premier temps, d'extraire l'insert grace aux enzymes de restriction. Si tu travailles proprement je ne vois pas pourquoi tu aurais du smir infernal. Sur une telle manip' je n'en ai jamais eu moi. La petite technique pour recuperer la bande est plutot sympa je trouve.  [...] Il n'y a pas besoin de connaitre la taille du gène (d'ailleur tu fais migrer de l'ADN ou de l'ARN et pas forcément un gène) car tu fais migrer un marqueur de taille à coté. On utilise l'électrophorèse par exemple pour contrôler les manips que l'on fait. Par exemple si tu veux voir si un gène que tu as voulu insérer est bien présent dans un plasmide, tu peux faire une restriction en coupant dans le gène hypothètique et tu calcules la taille des fragments obtenus en supposant que ton gène est présent.  [...]

fragment de restriction

Bonjour à tous, j'ai un petit soucis concernant les fragments de restriction. Que j'aie un gène qui soit clivé soit par des enzymes de restriction générant des bouts collants 5' ou 3' sortant, si je mets dans mon milieu réactionnel une DNA polymérase avec des nucléotides amorce etc elle va m'allonger ces 4 fragments sans problème ou bien est ce que 3' sortant je n'ai pas de groupement OH donc pas possible d'allonger.  [...] C'est le principe d'une PCR. Par contre les extrémités cohésives des fragments peuvent s'hybrider avec un des autres fragments créant ainsi une sorte de fusion. Mais comme le groupement 3' des tes fragments ne contient pas de OH normalement la polymérase seule ne devrait pas pouvoir allonger/compléter les trous de ton brin d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

J'ai donc réussi à tout faire sauf la carte de restriction de l'ADN 1 car je ne sais pas comment représenter le décalage (la substitution).  [...] que s'est-il passé pour que, avec BamH1, le fragment produit avec ADN2 de 5000 pb environ, se retrouve avec ADN1 à 3000 pb C'est quoi comme type de mutation il s'agit d'une D...N de...(nombre) de nucléotides.  [...]