• Forum - But, ARN, Cellules

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

Mon but est d'extraire l'ARN de cellules péritonéales pour faire une RT et ensuite une PCR.  [...] Le problème c'est que mon extraction avec le Tripure à un rendement faible et ensuite ma PCR ne donne pas de résultats. Enfait le signal de mon blanc est plus élevé que pour mes cellules péritonéales. Je pense peut-être à la présence d'un inhibiteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN bactéries lactiques

Je cherche actuellement à extraire les ARN totaux de cellules de bactéries lactiques dans le but de faire de la RT-PCR quantitative (mesure de l'expression d'un gène dans différentes conditions).  [...] Le problème principal venait de la quantité initiale de cellules. au lieu de partir de 1 ou 2 ml de culture comme recommandé, je suis parti de 4 à 8 ml de culture en milieu de phase exponentielle de croissance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manipulation de laboratoire - Extraction d'ARN

J'étudie l'effet des corticostéroïdes utilisés pour traiter l'ostéoarthrite sur ces ménisques. Dans mes manipulations, je tente d'extraire l'ARN des cellules méniscales dans le but d'analyser si des gènes tels que ceux du collagène ou de l'aggrecan subissent une modification de leur expression.  [...] En théorie oui, il y a des cellules (en faible densité) qui produisent toutes sortes de constituants de la matrice extracellulaire à l'intérieur (comme par exemple le collagène).  [...]

pcr quantitative et standard interne

J'ai compris le principe de la pcr (amplifier un fragment d'ADN ou d'ARN). Mais qu'est ce que la PCR quantitative c'est la taille du fragment amplifié que l'on veut connaitre, c'est ca et quel rapport avec la notion de standard interne (j'ai noté dans mon cours que le standard interne est un gène présent dans ttes les cellules et qu'il a pour but de corriger les erreurs O_O).  [...] Ainsi, un gène peut être très exprimé dans un tissu à un instant t ou peu exprimé. Si tu n'as pas de référence, difficile d'en faire la différence. Tu utilises donc un standard interne. On utilise en général un gène dit de ménage. En fait c'est un gène, comme pour la tubuline, qui s'exprime tout le temps, de la même manière quelque soit le tissu, la cellule ou le temps. J'espère que ça t'aide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Besoin d'un protocole pour étudier l'implication des miRNA dans une pathologie

Je dois pondre un protocole qui me permettrait d'étudier l'implication de miRNA sur le développement d'une pathologie. Le problème c'est que je n'ai jamais bossé sur les miRNA, je connais bien la théorie maintenant pour ce qui est de la pratique... En lisant un peu dans la littérature, j'ai déjà imaginé le début comme réaliser une extraction ARN sur les cellules de patients sain et malades dans le but d'évaluer l'expression de gènes impliqués dans la pathologie (surexprimés/sous-exprimés entre les conditions).  [...] Déjà ne cibler que les 3' UTR est une mauvaise idée puisque les miRNAs peuvent cibler n'importe quelle région d'un ARNm. En plus, tu raisonnes à l'envers je trouve. A ta place je chercherais à savoir si des miRNAs sont différemment exprimés entre la condition sain et la condition malade.   [...]

Que ce qu une ligné d encapsidation?

Le but est de mettre cet ARN vecteur, porteur du gène thérapeutique, dans les particules vides pour ensuite se diriger vers la cellule cible. Parfois, est ajouté un autre gène servant de marqueur de sélection.  [...] Ce système est conçu pour empêcher toute propagation ultérieure. Le risque d'obtenir des ARN réplicatifs par recombinaison-complémentation, devient de plus en plus faible avec les nouvelles générations de cellules productrices de vecteurs.  [...]

[Immunologie] Phagocytose et réponse immunitaire

Ma question première était posée dans le but de comprendre comment les cellules phagocytaires reconnaissaient les cellules à internaliser. A cette question Guillaume69 a parfaitement répondu.  [...] Par ailleurs, excusez moi de mélanger les questions, j'ai lu je ne sais plus où que les cellules infectées pouvaient agir comme des CPA. Si je me fie à la réponse de Guillaume69 (que je remercie encore une fois), les cellules infectées sont capables de secréter des cytokines en cas d'infection, dans le but d'être phagocytées.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...]

[Biochimie] Détergent le plus adéquat pour acellularisation

Certains auraient-ils déjà effectués ce type de protocole svp et si oui quelles sont les cellules qui supportent le mieux cette procédure svp ( le but étant au final d'avoir une matrice extracellulaire la moins dégradée possible ).  [...] Pour cela, j'utilise une solution maison d'ammoniac. NH4OH 20 mM, 0,01% Triton. C'est très doux et très rapide. Par contre, les cellules elles ne supportent pas du tout le traitement (c'est le but, non ). Mais la matrice est relativement bien conservée.  [...]

[Biologie Cellulaire] Ablation du pancréas

merci beaucoup pour ce site qui m'a appris que du glucagon etait sécrété par des cellules du systeme digestif (intestin) dans les cellules L dans le but de l'absorption intestinale.  [...] Est-ce que le glucagon sécrété par des cellules du systeme digestif (intestin) dans les cellules L dans le but de l'absorption intestinale jouent également un rôle dans le foie comme le fait le glucagon sécrété par le pancréas.  [...]