• Forum - BSA, Molécules, Anticorps

[Biochimie] Immunodiffusion

De plus, on a besoin de plus d'informations pour te répondre (ou peut-être que c'est juste moi qui en ai besoin, mes cours sur l'immunoprécipitation remontent à... longtemps...). Est-ce que tu es bien dans le cas d'une manip où tu as ton anticorps dans le gel et tu cherches à quantifier la BSA dans un échantillon inconnu en comparant cet échantillon avec plusieurs puits/disques étalons comme expliqué ici sur la 3ième diapo.  [...] Si oui, j'imagine que ça marche mieux avec un anticorps (Ac) polyclonal car ce dernier est en fait une soupe contenant des anticorps dirigés contre les différents épitopes de ton antigène (Ag, soit, ici, la BSA). Une même molécule de BSA va donc pouvoir fixer plusieurs molécules d'anticorps, ce qui formera un gros complexe antigène-anticorpS (1Ag-plusieursAc).  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot et interférences?

Peut etre que, tout en augmentant la résolution, tu pourrais tester en parrallèle un anticorps anti bsa pour etre sur que la bande que tu observes comigre bien avec ce que tu penses etre de la bsa. Je vais peut etre dire des bétises mais si tu utilises des sérums bovins (à moins que ce soit autre chose) tu auras donc des anticorps bovins anti bsa mais si ton anticorps primaire anti PDH n'est pas d'origine bovine (en général, c'est souris, lapin ou chévre), tu réveleras avec un anticorps secondaire (souris, lapin ou chévre) qui ne reconnaitra pas les anticorps anti bsa d'origine bovine. A moins que tu révele ta protéine différemment.  [...] J'ai utilisé un gel de polyacrylamide à 7.5%, et pour épuiser les éventuels anticorps anti-BSA de mes sérums, j'ai ajouté de la BSA dans mon tampon d'incubation des immunoblots... Effectivement, la tache que j'observe à la fin est beaucoup moins grosse et mes négatifs sont parfaitement négatifs.  [...]

Test Ouchterlony : spécificité stricte d'anticorps

On cherche à savoir si les anticorps contre l'albumine de sérum de boeuf (BSA) ont une spécificité stricte vis à vis de la BSA.  [...] je suppose au vu de la question qu'on recherche éventuellement des réactions croisées, c'est à dire une réactivité contre d'autre molécules peut etre proches de la BSA (albumine humaine par ex), mais il faudrait connaitre le détail du contexte pour mieux répondre.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Le marquage anti-Hsp60 se fait par immunofluorescence. Dans mon protocole, j'utilises un anticorps monoclonal anti-Hsp60 (Santa Cruz Biotechnology). Le protocole non détaillé.  [...] Dans mon protocole, pour l'étape 2 (après s'être débarassé du premier culot contenant les débris cellulaires et noyaux), ils centrifugent à 15000g pdt 5min. Tu récupères ainsi les mitochondries, les peroxysomes et les lysosomes. Ensuite, à toi de jouer pour isoler les mitochondries en utilisant par exemple un marquage immunofluorescent.   [...]

[Biologie Moléculaire] Aide Western Blot avec "taches" claires (marbrures de non marquage)

-Le blocage se fait dans des petits bacs à plat (lait écrémé ou BSA selon anticorps). Le volume semble suffisant et j'ai essayé avec plus sans faire mieux.  [...] -La révélation des anticorps secondaires HRP se fait à l'ECL (1ml), à plat. Je surveille bien sa répartition pendant les 2 min d'incub. Je ne pense pas non plus que ça vienne d'une mauvaise répartition ici car si je remet de l'ECL plus tard les taches claires sont exactement aux mêmes endroits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins - Page 2

Pour pAkt, il faut essayer différentes conditions de blocage, notamment BSA et lait, et aussi changer le milieu d'incubation de l'anticorps (lait ou BSA également).  [...] Pour le pIR, si ça ne marche pas bien il faut envisager de faire des WB a partir d'échantillons immunoprécipités avec l'anticorps IR.  [...]

[Biochimie] Caractéristiques des tampons utilisés en ELISA

Les solutions d'anticorps sont généralement préparées/diluées dans un tampon véronal (pH=7,4). Autant, je comprends la valeur du pH utilisé (valeur physiologique du pH sanguin, où les anticorps sont sensés être fonctionnels), mais je voudrais connaitre l'utilité du véronal.  [...] Le Tween 20 est un détergent qu'on utilise généralement pour limiter les fixations non spécifiques. Seulement voila, dans une série de manip', j'ai dilué mon anticorps secondaire dans du tampon véronal pur (càd sans BSA, ni tween). A ma grande surprise, je n'ai eu AUCUN signal dans tous les cas (donc, aucune fixation de mon anticorps secondaire Pourquoi ).  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

A la révélation, je n'ai aucune bande ou au contraire quelque fois j'ai des bandes intéressantes mais qui ne correspondent pas à la taille de la protéine (250kDa). (L'anticorps utilisé est celui qui est le plus abondant dans les publications).  [...] Là en revanche c'est beaucoup trop. D'une part, ca doit migrer n'importe comment dans vos gels, et d'autre part ca doit géner la reconnaissance des anticorps. Parfois moins est mieux que plus. Diminuez, même drastiquement. Essayez 10µg, 20µg, 40µg. Vous aurez peut être des surprises.  [...]

[Biochimie] Détection au cytométre de Flux

Mon problème se situe au niveau des résultats obtenus. J'utilise un anticorps couplé à du PE et les cellules sont perméabilisée à la saponine car le CMH de classe I que je souhaite détécté à été rendu soluble. Je commence donc par passer mon témoin négatif (cellules perméabilisées non transfectées + Ac-PE), j'obtiens un pic normal.  [...] Enfin, les cellules ont été lavées après incubation avec l'anticorps, 3 lavages successifs au PBS BSA + centrifugation à chaque fois.  [...]

[Immunologie] anticorps anti progestérone 11 alpha hemisuccinate

[Immunologie] anticorps anti progestérone 11 alpha hemisuccinate.  [...] Pour mon projet, je suis à la recherche d'un fournisseur ou un donateur d'anticorps (mono ou polyclonaux) anti progestérone 11 alpha hemisuccinate-BSA.  [...]