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cytologie

pour les selectines je crois que c'est des protéines transmembranaires,elles interviennent dans. l'inhibition de contact (Dans une boite de culture, on remarque que les cellules arretent de proliférer lorsque toute la surface de la boite est remplie. Cela signifie qu'un méssage peut passer de cellules en cellules afin de stoper la prolifération, ce message est envoyé par les selectine),  [...] Les selectines sont en effet des proteines trasnmembranaires couplées à des cadhérines et des protèeines de test su milieu extra cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Salut, voilà un petit protocole rapide pour l'extraction des protéines. Attention, vu que tu n'as pas précisé quel est le type de cellules que tu utilises, je te donne celui que j'utilise. extraction de protéines à partir de cellules de mammifères Hela (marche avec pleins d'autres types cellulaires bien évidemment).  [...] Je cultive les cellules sur boite (comme ce sont des cellules adhérentes), le protocole est donné pour extraire les protéines de cellules sur une boite de 6cm de diamètre.  [...]

Méthode ELISPOT !

. Quand je fait le lavage de cellules,,,,, les cellules qui sont attaché au ligands sont relargé est les liaisons sont cassé,, et en faite ce qui reste sur ma boite serais des ligands avec les protéines secréte par ces cellules,,, dans ce cas,, je pourais voir si muc1 était impliqué ou pas,, en utlisant des Anticorps,,,,  [...] pour la chromato, je pensais à fixer muc1 sur des billes de sépharose et incuber avec du lysat cellulaire. Ensuite, tu passes l'éluat sur western. Tu peux colorer la membrane au rouge ponceau pour avoir une idée de la taille des protéines récupérées puis, en fonction des différentes possbilités, tester les anticorps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

Par contre, si je n'ai pas beaucoup de cellules sur ma boîte, ou si j'ai peur que les protéines soient trop diluées, je racle mes cellules dans du PBS et je transfère le tout dans un eppendorf. Je centrifuge un peu pour faire tomber les cellules, un lavage au PBS en plus, et je reprend le culot dans 50ul de RIPA.  [...] Attention attention, le RIPA est un buffer principallement utilisé pour faire des IP. Si ce sont les protéines totales qui vous intéressent ce n'est pas une extraction en tant que telle qu'il faut faire, il vaut mieux lyser classiquement vos cellules dans du Laemli 1X avec béta-mercapto ou DTT.  [...]

[Biologie Cellulaire] Adhérence cellulaire

Bonjour à tous et merci pour vos réponses, en fait je sais que le plastique des boites de culture est traité pour permettre l'adhésion des cellules mais il faut quand même ajouter du sérum dans le milieu pour que les cellules adhèrent, pourquoi et via quelles protéines et quel type d'intéraction de plus les cellules produisent de la matrice et adhèrent à la boite de culture via l'intéraction avec cette matrice mais qu'en est il des cellules qui sécrètent peu ou pas de matrice.  [...] L'adhérence de la cellule à la matrice se fait grâce aux molécules d'adhérence (CAM. Cell Adhesion Molecules). Ce sont principalement des glycoprotéines transmembranaires qui sont liées au cytosquellettes par leurs domaines intracellulaires et à la matrice par leurs domaines extra-cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

Sinon, vous êtes en culture cellulaire. Qu'est ce qui vous empêche de faire une grosse quantité de boite, d'extraire vos protéines pour les concentrer.  [...] Pour l'écart de taille, il est évident qu'il y a un problème. Mais pas de conclusions attives, attendons déjà de voir ce que donnent vos gels avec moins de protéines.  [...]

Relation cancer(s)/candida albican - Page 3

Premierement, quelque chose me choque. Demostene, tu as demande a Vinc de tester le bicarbonate sur des cellules cancereuses en boite pour voir si il etait efficace... comment ces cellules peuvent elles etre cancereuses si elles sont sur une boite depourvue de candida albicans.  [...] Si on prend l'exemple du HPV et de sa relation avec les cancers cutanés dans la population générale, on observe pas de protéines virales (E6/E7) dans les tumeurs, des tumeurs chez le même individus sont HPV+ et d'autres HPV-, moins d'une copie par cellule, de gros problèmes de polymorphismes viraux etc.  [...]

[Biologie Cellulaire] Aide pour culture en boite de Pétri de cellules type cellules d'oignons.

Enfin, les cellules doivent être un minimum connu et que je puisse trouver sur des sites comme NCBI.org des protéines la composant.  [...] Des cellules en forme de synapse serait dur à distinguer l'une de l'autre si elles se collent. Ensuite, j'aimerai pouvoir voir les cellules lors de leur mitose, car mon projet se penche particulierement sur cet aspect. Enfin, je cherche des cellules pas trop complexe, car il m'est necessaire de connaitre des protéines vitales à son fonctionnement et leur chaine pepitidique (je prends mes sources sur NCBI.org, peux tu me conseiller un autre site ).  [...]

culture cellulaire carcinome HNSCC

Je ne connais pas ces cellules en particulier, mais si les cellules ont été mal séparées lors du dernier passage, vous avez des amas qui vont rester dans votre suspension et vont se coller au fond de la boite. Ils grandissent souvent un peu mais ont plutôt tendance à se décoller.  [...] Autre point, avez vous regardé l'ensemble de la boite Si votre incubateur n'est pas droit, ou mal monté, vos boites vont être inclinées et vous aurez énormément plus de cellules dans un coin de la boite par rapport au reste de la boite. Il m'est déjà arrivé de regarder rapidement une boite, voir 50% de confluence et puis de screener un peu et de me rendre compte que dans un autre coin de la boite on était à 100%.  [...]

conseil culture cellulaire

bonjour, si ta lignée cellulaire est du type adherente,laisse lui le temps de se fixer au moins 24h, puis élimine les cellules non fixées qui sont probablement mortes ( tu peux vérifier. fait un culot des surnageantes et un comptage en bleu trypan au 1/2.  [...] les bleues sont mortes. ) ensuite laisse tranquillement les cellules adherentes se diviser dans ta boite, cela peux prendre +/- de temps selon la quantité de cellules vivantes dans ta boite, pense à changer le milieux de culture et quand tu arrive à confluence tu peux passer ta culture pour de nouvelles générations.  [...]